生物分离工程-包含体复性.pptVIP

包含体的复性 贾凌云 基因工程产品目前的研发状况 目前基因表达的重组蛋白质已超过4000多种,其中用E.coli表达的要占90%以上,而这些蛋白质在E.coli中绝大多数是以包含体形式存在； 用于临床的基因重组药物只占研发药物的约1%。 存在的主要问题 复性效率低：常用的复性方法—稀释和透 析法的复性效率为5-20%； 与杂蛋白分离困难，产品成本高。 包含体 包含体是指外源基因在宿主细胞中表达时，表达的蛋白质不仅不能分泌到细胞外，反而在细胞内聚集成没有生物活性的直径约0.1-3.0μm的固体颗粒-包含体。这些基因表达产物的一级结构(即氨基酸序列)虽然正确，但其立体结构是错误的。 由于包含体具有很高的密度(约1.3mg/mL ) 它们在细胞裂解后可通过低速离心收获。 包含体形成的原因 1. 蛋白质高效表达的结果 在载体系统中采用强的启动子和增强子序列,靶蛋白质表达分别可占细胞总蛋白的40%～50%，蛋白质的合成速度太快，肽链来不及折叠形成正确构象，导致分子间疏水基相互作用聚合而不溶。 2.宿主内缺乏目标蛋白质正确折叠的辅助因子 对于大肠杆菌,来源于真核细胞的蛋白质是一种外界刺激因子,在进化过程中细菌细胞还没有形成与之完全相适应的结构基础和折叠机制,例如,处于还原环境的细菌胞质不能有效地完