阿卡波糖片中阿卡波糖的含量测定实施方案.pdf

阿卡波糖片中阿卡波糖的含量测定实施方案 一、设计背景 阿卡波糖是从放线菌中分离得到的由4 个单糖构成的寡糖，其结构中含有1个不 饱和环多醇。它对小肠壁细胞刷状缘的α-葡萄糖苷酶具有抑制作用，能阻碍肠道内的 多糖、低聚糖以及双糖的水解，从而减少小肠对单糖的吸收，具有降低餐后血糖浓度 的作用。阿卡波糖片用于2 型糖尿病，以及降低糖耐量低减者的餐后血糖，可单独应 用，也可与其他类的口服降糖药和胰岛素联合应用。 根据文献报道关于阿卡波糖片的含量测定方法包括高效液相色谱法、毛细管电泳 法和电化学分析法。毛细管电泳法操作复杂，并且重现性较差；而电化学分析法需采 用电聚合方法制备聚氨基苯甲酸修饰电极，因阿卡波糖的电化学活性较弱，所以利用 铁氰化钾作为探针分子，通过铁氰化钾在修饰电极上的电化学行为来间接测定阿卡波 糖的含量，也较复杂，不易推广应用。实习公司采用的是高效液相色谱法测定阿卡波 糖含量，该方法具有准确、快速、专属性强的特点，且样品制备操作简便，适合推广 应用。但是，通过查阅文献和试验发现，很多检测过程存在一些问题： （1）大多数采用氨基柱，蒸发光散射 (ELSD) 检测器或示差折光检测器 (RID)， 理论上氨基柱键合的氨基基团易流失，柱性能不稳定，易造成实验结果的重复性差； ELSD RID 或 在吸收波长、得到样品信息的效果一般。 （2）色谱条件不完善，导致检测结果不精确、稳定等。 针对以上常见的问题，本设计通过改善色谱柱、检测器和色谱条件，对阿卡波糖 的含量测定方法进行改进设计，建立一种适合推广应用的阿卡波糖片含量测定方案。 二、设计依据 中国药典2020年版里记载高效液相色谱法应用范围广，快速简便，灵敏度高， 是最常用的化学含量检测法。高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、 有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳 烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析 等物质的分析。本设计方案依据2020年版 《中国药典》设计。 三、检测方案 （一）检验仪器及试剂、检验品 1.仪器：高效液相色谱仪 （日本岛津，LC-10AT）；紫外可见检测器 （日本岛津，- SPD-10AVP）；电子天平 （瑞士梅特勒公司，Mettler XP-205）；超声仪 （昆山市超 声仪器有限公司，KQ-800KDE）；电热恒温鼓风干燥箱 （上海跃进医疗器械有限公 司，GZX-GF101）。 2.试剂 乙腈 （上海精化科技研究所，色谱纯）；磷酸 （上海精化科技研究所，色谱纯）； 磷酸二氢铵（上海精化科技研究所，分析纯）、盐酸（上海精化科技研究所，分析纯）、 30%过氧化氢 （上海精化科技研究所，分析纯）、辛烷磺酸钠 （上海精化科技研究所， 分析纯）、氢氧化钠 （上海精化科技研究所，分析纯）；阿卡波糖对照品 （东京化成 工业株式会社，纯度98.0%）；阿卡波糖片 （德国Bayer Health CareAG 公司）。 纯化水、乙腈试剂 （HPLC 级） 检测品：阿卡波糖样品 阿卡波糖对照品 3.玻璃仪器：容量瓶、量筒、试剂瓶、移液管、抽滤瓶、布氏漏斗、 4.其他仪器及试剂：SHZ-D(III)循环水式真空泵、PS-20A 超声波清洗器、AUX220 分析天平、0.22μm 有机溶剂过滤膜 （均已经过校验，并有校验合格证，且在有效期 范围内）。 （二）检验方法 1.色谱条件 色谱柱：C18250×4.6mm，粒度5μm； 检测器：紫外检测器； 流动相：乙腈-10mmol·L-1磷酸二氢铵溶液 （含0.04%辛烷磺酸钠，磷酸调至pH 3.3） （15 ∶85）； 流速：0.8mL/min； 检测波长：200nm； 30 柱温： ℃； 进样量：10μL； 采集时间：25min。 2.稀释剂的制备 精密量取500mL 纯乙腈于1000mL 试剂瓶中，再量取500mL 纯化水于试剂瓶中， 混匀，用0.45μm 有机溶剂过滤膜过滤后，于超声波清洗器中超声15min，脱气。 3.对照品溶液的制备 精密称取阿卡波糖对照品约500mg，置于200mL 量瓶中，加入水适量，超声使 溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，即为对照品储备液。精密量取对照品储