血清ALT标准曲线法课件.ppt

11.计算回归方程：点击趋势线（也就是标准曲线）然后 按右键，选趋势线格式，在显示公式和显示R平方值（直线相关系数）前点一下，勾上。如图11： 12.点击“确定”，公式和相关系数都出来了。如图12： 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定 掌握ALT活性测定的基本原理; 熟悉分光光度计的使用方法; 了解ALT活性测定的临床意义; 学习excel制作标准曲线的方法。 【目的要求】 1.器材 试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计、比色杯、记号笔。 2.试剂 (1)新鲜血清 (2)底物液 (3)2,4-二硝基苯肼 (4)丙酮酸标准液 (5)NaOH溶液 (6)磷酸盐缓冲溶液 【器材和试剂】 分光光度法是以朗伯—比尔定律为基础，建立起来的分析方法。 【实验原理】 It/ I0比值称为透光率T，通常用百分数表示 有色溶液吸收光的程度称为吸光度，用A表示。 T= It/Io A=-logT=-log(It/Io ) 朗伯-比尔定律：当一束单色光通过有色溶液时，吸光度A与溶液的浓度C和溶液的厚度L的乘积成正比关系 A=KCL 式中K为一常数，其大小随溶液的性质和入射光的波长而定 【实验原理】 朗伯-比尔定律应用 A标准=KC标准L A测定=KC测定L 标准品法测定未知样品含量 C测定= A测定 A标准 × C标准 朗伯-比尔定律应用 标准曲线法测定未知样品含量 用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，以标准品的浓度作为X?坐标，以吸光度值为Y?坐标，绘制标准曲线（通常为直线）。 可用未知样品的吸光度在标准曲线上查找出相应的浓度 。 吸光度 浓度 朗伯-比尔定律应用 Excel制作标准曲线测定未知样品含量 用标准品配制成不同浓度的标准溶液，测其相应的吸光度值，用excel制作标准曲线，并用待测浓度的溶液吸光度在标准曲线上求得相应的浓度数值。 谷丙转氨酶 ALT 【实验原理】 取试管6支，按下表加入试剂： 【实验操作】 丙酮酸标准液的制备和样品测定 　 加入物(mL) 空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管 标准品 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 　 丙氨酸氨基转移酶基质液 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.5 0.1mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 待测血清 　 　 　 　 　 　 0.1 置３７℃水浴中保温３０分钟 　 ２,４－二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 置３７℃水浴中保温２０分钟 　 0.4mol/L NaOH溶液 5 5 5 5 5 5 5 混匀，静置１０分钟，在波长520nm，以空白管调零，测定吸光度值 　 相当于酶活性浓度（U/L单位） 0 47 95 162 250 333 　 A1 　 　 　 　 　 　 　 A2 　 　 　 　 　 　 　 A3 　 　 　 　 　 　 　 A(平均值) 　 　 　 　 　 　 　 丙酮酸标准液的制备和样品测定 　 加入物(mL) 空白管 标准1 标准2 标准3 标准4 标准5 测定管 校准品 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 　 丙氨酸氨基转移酶基质液 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 0.5 0.1mmol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.4) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 待测血清 　 　 　 　 　 　 0.1 置３７℃水浴中保温３０分钟 　 ２,４－二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 置３７℃水浴中保温２０分钟 　 0.4mol/L NaOH溶液 5 5 5 5 5 5 5 混匀，静置１０分钟，在波长520nm，以空白管调零，测定吸光度值 　 相当于酶浓度 （U/L单位） 0 47 95 162 250 333 　 A1 0 0.115 0.154 0.225 0.312 0.418 0.089 A2 0 0.117 0.159 0.232 0.318 0.418 0.089 A3 0 0.117 0.160 0.232 0.312 0.4 0.090 A(平均值) 0 0.116 0.157 0.230 0.317 0.419 0.089 1.先作出标准曲线: 测出标准溶液的A值及待测溶液的A值,输入excel(B列所示), 输入对应的标准溶液浓度, 如图1: 【如何用excel制作标准曲