蛋白质的分离纯化及双向电泳.pptVIP

2．蛋白质的纯化方法 （4）层析法 ?凝胶过滤法 第30页，共68页，编辑于2022年，星期六 2．蛋白质的纯化方法 利用蛋白质表面存在的疏水区域的强度、大小不同，而被吸附到连接有疏水基团的层析介质上。 离子强度增大可增强吸附能力，因此常常在2mol/L或3mol/LNaCl溶解样品，洗脱时可通过降低盐浓度、增加乙二醇浓度进行梯度洗脱。 正丁基-Sepharose、 正辛基-Sepharose 苯基-Sepharose （4）层析法 ?疏水层析 第31页，共68页，编辑于2022年，星期六 2．蛋白质的纯化方法 这是一种高效分离纯化蛋白的方法。其原理是不同的蛋白质分子对于固定化在载体上的特殊配基具有不同的识别和结合能力。 选择与待纯化蛋白质具有特殊识别和结合作用的配基，然后应用化学方法将该配基与载体共价连接。将这种连接有配基的载体装入层析柱中，当含有待纯化的蛋白质溶液通过层析柱时，该蛋白质即与配基发生特异性结合而被吸附在层析柱上，而其它蛋白质则流出柱外。被特异性结合在层析柱上的蛋白质，可以用适当的配体洗脱液洗脱。 （4）层析法 亲和层析法 第32页，共68页，编辑于2022年，星期六 2．蛋白质的纯化方法 常用的配基有抗体、抗原、激素或受体蛋白、酶的底物和抑制剂等。层析柱载体为琼脂糖凝胶等。 （4）层析法 亲和层析法 第33页，共68页，编辑于2022年，星期六 2．蛋白质的纯化