蛋白质的分离纯化与定性定量分析.pptVIP

第52页，共100页，编辑于2022年，星期六 根据凝胶的均匀性（孔径、pH）可分为连续与不连续两类； 根据是否加蛋白质变性剂，可分为变性与非变性两类； 根据是否加还原剂2-巯基乙醇或DTT，可分为还原与非还原两类； 还可根据电泳装置的不同，分为圆盘电泳和平板电泳。 PAGE的分类 第53页，共100页，编辑于2022年，星期六 平板PAGE 第54页，共100页，编辑于2022年，星期六 不连续平板PAGE，是使用 最广泛的蛋白质电泳技术，它由浓缩胶与分离胶两部分组成。 不连续PAGE有很高的分辨力，因为它有以下三种效应： 浓缩效应 电荷效应 分子筛效应 不连续PAGE 第55页，共100页，编辑于2022年，星期六 制备凝胶 样品电泳 目的蛋白检测 基本操作 第56页，共100页，编辑于2022年，星期六 染色法：考马斯亮蓝染色法（多种类型可选）、银染法； 活性检测法：适用于Native PAGE，其中蛋白质保持天然活性，可用酶学方法检测； 免疫印迹法：用特异性抗体检测蛋白质的技术。 PAGE的检测方法多种多样 第57页，共100页，编辑于2022年，星期六 2. 等电聚焦电泳 根据蛋白质的等电点进行分离的一种技术。 基本原理：利用两性电解质载体形成一个连续而稳定的线性pH梯度，使pH从正极到负极逐渐增加。蛋白质分子在偏离其等电点的pH位置带电，因此在电场中可以移动；当蛋白质移