纤维素乙醇发酵全.pptVIP

S.Cerevisiae对不同氮源的吸收利用的途径与机理 谷氨酸和谷氨酰胺在氮代谢中起着重要的作用，氨、谷氨酸和谷氨酰胺之间的相互转化被称为氮的中间代谢途径 (CNR)，如图所示。 当前63页，共76页，星期日。 第六十三页，共七十六页。 S.cerevisiae在脯氨酸作为氮源时转录水平的调控机制 吸收转运脯氨酸的两个酶: Gap1p，一般氨基酸的通用的通透酶 Put4p，脯氨酸特异性的通透酶 当前64页，共76页，星期日。 第六十四页，共七十六页。 D:酵母菌二级筛选（杜氏小管法） （1）酵母代谢木糖和葡萄糖混合糖的驯化实验 14株 当前31页，共76页，星期日。 第三十一页，共七十六页。 （2）酵母耐酸试验 8株 当前32页，共76页，星期日。 第三十二页，共七十六页。 （3）酵母耐乙醇试验 当前33页，共76页，星期日。 第三十三页，共七十六页。 E: 酵母菌三级筛选(C02失重法) 以UV2号菌株为最终发酵用菌株。 当前34页，共76页，星期日。 第三十四页，共七十六页。 F: 糖浓度对乙醇产率的影响 当前35页，共76页，星期日。 第三十五页，共七十六页。 G: 诱变菌株UV2的遗传稳定性试验 小结：从优良稳定的南阳酵母2.606，热带假丝酵母2.637和2.402中筛选出可同时糖化五碳糖和六碳糖，且乙醇产率较高的热带假丝酵母2.402进行紫外诱变，通过初筛、复筛，获得一株耐酸耐乙醇的酵母菌株。在pH3.5和10%乙醇的培养基中，表现出良好的发酵性能。在此条件下进行乙醇发酵试验，乙醇转化率可达0.329g/g底物，同时诱变菌株与出发菌株相比，乙醇转化率提高了28.57%。连续传代10次发酵性能无明显变化，表明菌株具有一定的遗传稳定性。 当前36页，共76页，星期日。 第三十六页，共七十六页。 纤维素糖化发酵工艺 同步糖化发酵法（SSF) 分批补料技术和纤维素-淀粉共发酵 水解发酵二段法（SHF) 当前37页，共76页，星期日。 第三十七页，共七十六页。 定义：将纤维素先用纤维素酶糖化，再经酵母发酵成酒精的方法。 优点：可以分别使用水解和发酵各自的最适条件(分别为50℃和30℃)。 缺点：酶水解产生的产物(纤维二糖和葡萄糖)会反馈抑制水解反应 水解发酵二段法（separate hydrolysis and fermentation , SHF） 当前38页，共76页，星期日。 第三十八页，共七十六页。 SHF方法的改进 Ghose等将高产菌株绿色木霉QM9123的纤维素酶浓缩5~8倍，加入30%研磨的木质纤维素悬浮液，在反应器内连续糖化，将生成的葡萄糖通过超过滤膜分离出去，从而消除产物抑制，提高了反应速度，流出液的葡萄糖浓度达10%以上。但膜技术产业化有一定困难。 当前39页，共76页，星期日。 第三十九页，共七十六页。 纤维素酶水解和菌体酒精发酵同时进行的方法。 优点：在加入纤维素酶的同时接种酒精发酵的酵母，可使生成的葡萄糖立即被酵母发酵成酒精；去除了产物抑制，就可以不妨碍纤维素糖化的继续进行，酒精得率可明显提高。 关键：选择最适的酵母，酶解的最适温度约为50℃，而普通酿酒的最适发酵温度通常约30℃。 同步糖化发酵(simultaneous saccharification and fermentation, SSF) 当前40页，共76页，星期日。 第四十页，共七十六页。 SSF实例 彭林才等人以卫生纸厂初级污泥作为生物质原料，采用同步糖化发酵法生产燃料乙醇，经过条件优化乙醇质量浓度达19.5g/L，是理论值的63.9%。 当前41页，共76页，星期日。 第四十一页，共七十六页。 同步糖化共发酵(simultanenous saccharification and cofermentation, SSCF ) 利用能同时发酵戊糖和己糖的稳定的基因重组菌株进行同步共发酵。 实例：在中试条件下，经过稀酸预处理的玉米纤维在总固体物浓度为20%、纤维素酶用量为10 IFPU/g纤维素、30℃、150 rpm、pH 5.0条件下，使用普度大学构建的重组酵母LNH-ST菌株进行同步糖化共发酵4天，78.4%的可用葡萄糖和56.1%的可用木糖被转化成乙醇。 当前42页，共76页，星期日。 第四十二页，共七十六页。 微生物直接转化法(consolidated bioprocessing,CBP) 纤维素酶的生成和乙醇发酵由一种微生物或一个微生物群体来实施。 CBP需要的菌株可以通过代谢途径工程方法构建。 实例1：Ingram等将欧文氏菌(Erwinia)的两种内切葡聚糖酶的基因克隆到能生产乙醇的克雷伯氏菌(Klebsiella)中，使该菌配合真菌纤维素酶发酵纤维素产生的乙醇增加了2