宠物医学—实验室检查判读之细胞学检查制片.ppt

固定30分钟后，用尖头的硬签轻轻将沉淀物挑出 常规脱水 包埋 细胞团块切片外貌 细胞团块切片 细胞切片 CD3 细胞切片 CD45RO 第二节 针吸细胞学检查 一、FNAC的基本概念 FNAC是使用普通注射针头（外径0.6-0.9mm）及针管（5-20ml）,刺入病变区域内，通过提插针方式将病灶内的细胞或小组织块切割下来，同时借助针管内负压将其吸出，涂片及染色后在光镜下阅片，最后完成病理诊断的一种活检方法。 针吸标本采集原理及穿刺器的改进 穿刺原理 穿刺针准确进入病变部位后强有力切割与足够负压吸取过程的同步进行。 穿刺器的改进 针吸检查应用范围 经体表可触及到的肿块的检查：头颈部、口腔、躯干部、四肢部、会阴部等可触及的肿块。 在影像学引导下或手术探查时对脏器肿块的检查：呼吸道、消化道、泌尿道、生殖道等。 方法二：倒去上清液，将试管倒立在卫生纸上 方法三：用棉签吸去液体 吸出沉淀 涂片方法一：吸管涂片（细胞较干时推荐） 涂片方法二：推拉法涂片 涂片方法三：平拉法涂片 （推荐，但细胞较干时不要用） 结果：涂片是湿润的，但没有流动的液体 立即固定 细胞很少的标本 放入50ML试管，离心 吸出沉淀物 涂片待自然干燥后不需固定，直接进行Diffeqiuckde B、C液浸染，免冲洗。注意动作要轻，不能用流动水冲洗，以免样本丢失 血多细胞量少的标本 大量沉淀物 如果细胞沉淀物多，可将吸管中的空气挤出，直接把吸管插入沉淀物中，轻轻吸出沉淀物，直接涂片。 沉淀物的上层 没有或很少有沉淀物 吸取上层沉淀物，放入25%酒精或冰醋酸酒精液内（25ml酒精+10ml冰醋酸+65ml水）内，打匀，再离心沉淀。然后，吸取沉淀物，涂片固定。 需要注意的是，处理后的细胞形态与排列方式都会发生不同程度的改变，所以，不是可诊断细胞量少，尽可能不用。液基细胞学也是如此。 5X 未经处理的胸水 5X 处理后的胸水 但是，经过处理的胸腹水细胞多多少少总有褪变，因此，不是血液太多，细胞成份太少，一般不采用破红细胞法。 脱落细胞制片的关键 立即固定： 当细胞涂片完成后，应立即放入95%酒精液体内固定，至于固定液：如甲醇、酒精乙醚液等效果无明显差异。细胞的褪变主要原因不是固定液的种类，而是在制片过程中空气的氧化过程---干燥。 干固定 湿固定 固定时间：5分钟即可。 剩下的送检液体不要立即倒去，等阅片完成后，看看需不需要再制片做免疫组化或制成组织块。（可放在冰箱内，也可放在室温状态下24小时以上） 细胞涂片40X CK pan 40X CK18 40X CK19 40X Calretinin 染色 1、从固定液拿出后，不经水洗，立即放入 苏木素染色3-5分钟。 2、水洗。 3、1%盐酸酒精分化（不能用1%盐酸水溶液分化）。 4、温水蓝化。 5、伊红染色 1-2 秒 6、75%、85%、95%（2道）、100（2道） 酒精脱水。 7、二甲苯透明。 8、封片。（不能干燥，否则会引起细胞收缩和黑色空气结晶） 细胞蜡块制作 离心后吸出上清液 轻轻沿管壁加入95%酒精，细胞量少的话， 可用 0.5ml离心管离心，加入琼脂 * 实验室检查判读 ——细胞学检查制片 脱落细胞标本采集 自然分泌物采集 自然分泌物主要指：呼吸道分泌物、浆膜腔积液、尿液、乳头溢液、阴道分泌物等。 呼吸道分泌物采集： 颗粒状痰、血丝、血痰、泡沫痰、黄痰、铁锈痰 制片：拉片 固定：95%酒精 30-60分钟 染色：Diff-Quik染色或HE染色 胸腹水、尿等液体 细胞学制片存在的问题： 1、有效细胞数量少（造成漏诊） 2、细胞退变、结构不清（造成误诊断） 液体标本制片规范 1、取液：轻轻的把送检液体上部倒掉，取下层液体，放入离心管。也可直接吸取底部液体。 2、转速1000/分，2-5分钟。 3、制片方法：看沉淀物的量（液体的清亮度）多少而区别对待： （1）一般量制片： 吸入试管内 放入离心机 离心完成后看底部白膜或最上层细胞 方法1：吸干上清液 *