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应用组织芯片研究Claudin4在胃腺癌中的表达及临床意义 文档信息 属性： Doc-03D0SF，doc格式，正文7933字。质优实惠，欢迎下载！ 说明： 作为医药学资料、临床医学资料的写作参考资料，提供解决怎么写及格式等相关问题。 适用： 作为文章写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：应用组织芯片研究Claudin4在胃腺癌中的表达及临床意义 2 1 材料及方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：金属硫蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义 7 1 资料与方法 8 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 应用组织芯片研究Claudin4在胃腺癌中的表达及临床意义 文1：应用组织芯片研究Claudin4在胃腺癌中的表达及临床意义 胃癌是我国的常见病和多发病，每年胃癌新发病例及死亡率分别占全部恶性肿瘤的17%和20%以上，仅次于肺癌[1]。胃癌患者的预后与肿瘤的侵袭转移密切相关。胃癌侵袭转移的重要机制之一是细胞间接触抑制的丢失，细胞粘附性降低。细胞间的连接受连接复合体(包括紧密连接、粘附连接、桥粒等)调节， Claudi是构成紧密连接的骨架蛋白，参与维持细胞极性、屏障及信号传导功能。近年发现Claudi在各种上皮源性肿瘤中表达异常，可能参与肿瘤的发生发展，但Claudi表达与胃腺癌侵袭转移及预后间的关系尚未完全阐明。Claudin4是Claudi家族成员之一，是产气荚膜梭菌肠毒素﹙CPE﹚碳末端的受体，是肿瘤靶向治疗的研究热点。笔者应用组织芯片免疫组织化学染色，检测Claudin4在胃腺癌组织中的表达，探讨其与胃腺癌侵袭转移及预后的关系。 1 材料及方法 材料 2000-2006年福建医科大学附属第一医院胃癌手术切除、有完整随访资料的存档蜡块109例。男性79例，女性30例，年龄中位数61岁(23～84岁)。病理诊断按照2003年WHO肿瘤新分类诊断标准(消化系统分册)：其中高～中分化腺癌28例，低～未分化腺癌81例;浸润程度：黏膜层～肌层浸润63例，浆膜及浆膜外层浸润46例;淋巴结转移98例，无转移11例;TNM分期：Ⅱ期12例，Ⅲ期75例，Ⅳ期22例。均为死亡病例，随访时间1～76月，中位生存时间12月。 组织芯片制备 根据HE切片在供体组织蜡块上选取目标区域并标记：黏膜层癌旁胃黏膜(正常胃黏膜上皮66例，肠化生上皮43例)，黏膜层胃癌组织，肿瘤中心区胃癌组织(即黏膜层与侵袭前沿中间的胃癌组织)、侵袭前沿区胃癌组织(即肿瘤纵向侵袭胃壁最远处)及淋巴结转移灶胃癌组织[2];将相应组织由供体蜡块转移至受体蜡块的阵列孔中，每个孔芯的直径2 mm，每个蜡块含有31个点，其中一个为标志点。 免疫组织化学染色 免抗人Claudin4多克隆抗体(浓缩型，1∶400稀释，德国Thermo Scientific公司);二抗(羊抗兔试剂盒，SP法，美国Labvision公司)。操作步骤如下：组织芯片蜡块4 μm连续切片，60 ℃烤片14 h，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水后水化，高压热修复(柠檬酸pH ，2 min)，自然冷却，过氧化物酶阻断10 min，非免疫动物血清室温孵育10 min，一抗室温孵育3 h，二抗孵育10 min，DAB显色镜下控制，每个步骤之间PBS冲洗3次，每次2 min。苏木素复染。以PBS代替一抗作阴性对照。 判读标准 Clauidn4染色定位于胃腺癌细胞及癌旁胃腺上皮细胞膜和胞质，根据阳性染色细胞着色的程度判别结果：“-”为阴性;“+”呈棕黄色颗粒状;“”呈棕褐色颗粒状(图1)。两位病理科医师在双盲的情况下进行判读，如果判读结果不一致，则重新评估直到达成一致为止。 统计学处理 运用SPSS 软件进行统计学分析，用MannWhitney U检验对两样本半定量等级资料进行分析，选用KruskalWallis H检验对多个样本的半定量等级资料进行分析，采用KaplanMeier法进行单因素生存分析。 A：正常胃黏膜上皮;B：肠化胃黏膜上皮;C：胃腺癌与正常胃黏膜移行处;D：肿瘤中心癌组织;E：侵袭前沿癌组织;F：淋巴结转移灶。 图1 Claudin4在胃腺癌不同部位及癌旁胃黏膜呈异质性表达(SP法 ×400) Fig 1 Claudin4 heterogeneous expression in different areas of gastric adenocarcinomas and adjacent noneoplastic gastr