染色法测细胞周期.pptVIP

关于染色法测细胞周期 第1页，共26页，编辑于2022年，星期一 一） 细胞DNA含量检测 细胞固定后用PI （Propidium iodide碘化丙啶），染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，荧光强度与PI的结合量呈良好的线性关系，根据这个原理，可测出细胞的DNA含量。用于细胞周期、细胞倍体以及凋亡的检测。 第2页，共26页，编辑于2022年，星期一 第3页，共26页，编辑于2022年，星期一 单参数直方图 图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图 第4页，共26页，编辑于2022年，星期一 DNA细胞周期分析 细胞周期 G2 M G0 G1 s 200 400 600 800 1000 G0 G1 s G2 M DNA分析 DNA含量 细胞数量 2N 4N  第5页，共26页，编辑于2022年，星期一 第6页，共26页，编辑于2022年，星期一 2倍体 异倍体 4倍体 肿瘤组织中的各种DNA倍体 第7页，共26页，编辑于2022年，星期一 含量与凋亡关系 DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。 凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将DNA降解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含量减少，成为亚2倍体。 第8页，共26页，编辑于2022年，星期一 第9页，共26页，编辑于2022年，星期一 第10页，共26页，编辑于2022年，星期一 2. 凋亡研究 在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，即凋亡峰。 检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。 第11页，共26页，编辑于2022年，星期一 第12页，共26页，编辑于2022年，星期一 Annexin V Assay 第13页，共26页，编辑于2022年，星期一 图 Annexin V/PI双标记分析细胞凋亡和坏死 第14页，共26页，编辑于2022年，星期一 Date acquired: 14-Jan-03 File: 7Gy 4hr.001 Source: dongbo DIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04 Apoptosis: 13.66 % Mean: 27.48 图 FCM测试细胞周 期分布和凋亡 第15页，共26页，编辑于2022年，星期一 根据凋亡细胞的特点来检测 在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞浆和细胞器密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲，但早期细胞膜的完整性未受到破坏 凋亡细胞的FSC ？SSC ？ 细胞坏死时，细胞肿胀，FSC ？，SSC ？ 第16页，共26页，编辑于2022年，星期一 正常人静止体细胞有46条染色体，相当于7.10-12 pg DNA/细胞核，我们称之为二倍体细胞，而正常增殖细胞则存在不同的DNA含量。在细胞周期(G0，G1，S，G2 ，M)的各个时期，DNA含量随各时相呈现出周期性的变化：在G1期，细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体； 第17页，共26页，编辑于2022年，星期一 进入S期后，DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1和G2期之间；当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期，G2期细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期，因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期；一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个子细胞，这两个子细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期(G0期)，而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1，S，G2/M期。 第18页，共26页，编辑于2022年，星期一 第19页，共26页，编辑于2022年，星期一