《转基因食品与安全》教学PPT课件.ppt

2. ELISA法 （酶联免疫吸附法） 原理：将抗原或抗体用小分子的标记剂如荧光素、酶、放射性同位素等加以标记，借以提高其灵敏度的一类新技术。 ELISA是一种免疫测定。加入反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 优点：快速、方便、重复性好。 缺点：只能对某一特定蛋白进行检测。 间接免疫吸附测定法： 已知抗原吸附在微孔板内 加待检抗血清（含抗体） 加酶联抗抗体，与已吸附的抗原抗体复合物相结合 加入该酶底物 反应终止后依底物颜色深浅，可知样品中抗体的含量。 双抗体夹心法原理 酶标板（ 96孔聚苯乙烯微孔板） 酶联免疫吸附法（ELISA） 　双抗体夹心法 ： 　　 是测定待测样本中是否含有抗原的方法： 1） 将含已知抗体的抗血清吸附在微孔板上，形成固相抗体。 2） 加待测抗原，保温反应。形成固相抗原抗体复合物。 3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。 4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。 样品中土霉素的ELISA检测 样品 1 2 3 4 5 CK OD 1.91 1.45 1.96 1.48 1.03 2.74 OTC量 0.056 0.457 0.021 0.109 2.952 （二）生物化学性质和生物学活性分析 通过定性和定量测定表达产物的生物化学性质和生物学活性，以鉴定表达产物的存在。 如: 酶活力测定，受体蛋白分析，激素活性的检测。 转基因棉花饲喂棉铃虫时被食用情况（左图为转基因抗虫棉，右图为非转基因棉） 第三节 基因芯片技术 基因芯片：指将大量的靶基因或寡聚核苷酸片段通过机械手有序的、高密度的排列在玻璃、硅或尼龙膜上，制成芯片。 传统的转基因食品检测方法 待测样品的制备 食品中DNA的提取 食品中核酸的定量 转基因食品PCR检测体系引物的设计 定性定量PCR扩增反应 结果分析 传统的转基因食品检测方法的缺点 血清学和PCR检测技术在大部分情况下一次实验只能检测一种目标分子，并且检测过程复杂，效率较低。 生物芯片（biochip） 也称微列阵（microarray）,就是在一块玻璃片、硅片、尼龙膜等材料上放上生物样品，然后由一种仪器收集信号，用计算机分析数据结果。 生物芯片技术是随着人类基因组计划（HGP）的进展而发展起来的，它是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一，它融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术，具有重大的基础研究价值，又具有明显的产业化前景。 生物芯片的种类 生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。 所有的生物芯片技术都包含四个基本要点：芯片的制作、杂交或反应、测定或扫描、数据处理。生物芯片的技术核心是芯片的制备及反应信号的检测。 基因芯片 基因芯片，又称DNA芯片，包括寡聚核苷酸芯片和cDNA芯片。 理论基础是杂交测序，即利用核酸杂交的原理检测未知分子。在硅胶、玻片等固相载体上按特定排列方式固定大量核酸探针或基因片段，与标记的待检测样品进行杂交，通过检测标记物信号得到杂交结果，利用计算机分析从而获得大量信息。 基因芯片检测原理 cDNA芯片可以检测待测样品中是否有与之互补的序列。 将待测样品中的mRNA被提取后，通过反转录反应过程获得标记荧光的cDNA，与包含上千个基因的cDNA微阵列进行杂交反应16h后，将玻片上未互补结合反应的片段洗去，再对玻片进行激光共聚焦扫描，测定微阵列上各点的荧光强度，推算出待测样品中各种基因的表达水平。 转基因食品的检测： 把现有的转入作物体内的基因片断制成芯片 提取待测植物的RNA 在反转录中标记cDNA 与检测芯片杂交 分析结果 特点： 机械化程度高，检测结果准确可靠，但检测成本高，对技术要求较高。 该技术在转基因食品检测中有广阔的前景。 Western 杂交原理 从生物细胞中提取目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和