菊花的组织培养课件.pptVIP

* 专题3 植物组织培养 课题1：菊花的组织培养 第一页，共三十六页。 一、基础知识 1、植物的组织培养 （1）细胞的分化 ①概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 第二页，共三十六页。 （3）植物组织培养 细胞离体 ①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他外界条件 ②原理: 细胞的全能性 从活植物体上切下进行培养的那部分 组织或器官 ③相关概念: 外植体： 第三页，共三十六页。 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。 细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。 愈伤组织： 脱分化： 再分化： 第四页，共三十六页。 第五页，共三十六页。 第六页，共三十六页。 2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 第七页，共三十六页。 第八页，共三十六页。 （2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括： A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等 C、有机物、植物激素 第九页，共三十六页。 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养。 第十页，共三十六页。 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） （3）植物激素的影响 第十一页，共三十六页。 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 第十二页，共三十六页。 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的分化 生长素 细胞分裂素： ＝ 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 第十三页，共三十六页。 3、植物组织培养过程: 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 离体组织、器官或细胞 第十四页，共三十六页。 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 4、植物组织培养的应用： 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 第十五页，共三十六页。 人工种子 第十六页，共三十六页。 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1、配置各种母液 第十七页，共三十六页。 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。 第十八页，共三十六页。 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。 ① 配制培养基（固体） ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。 第十九页，共三十六页。 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流