免疫学免疫实验三.pptxVIP

病原生物学和免疫学实验（免疫学实验）;病原生物学与免疫学实验（免疫学实验）;实验三;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;（一）1、酶联免疫吸附试验（ELISA）;“ELISA双抗体夹心法”，第5步，1-7孔加不同浓度TNF-α标准品；后5孔加待检标本2孔、阴性对照1孔、空白对照（样品稀释液） 2孔；每孔100ul，37℃，30分钟：;How to Use a Micropipettor; Carefully and slowly release plunger. (Allow the pipet tip to fill to final volume before removing it from solution to avoid the presence of bubbles in the plastic tip.) Discharge the solution into the appropriate container by depressing plunger. Remember to change tips between different solutions to avoid mixing or contaminating the solutions used.;免疫学检测技术;回顾概念：;;如何检测抗原或抗体？（基本原则）;抗原抗体反应的可见性：; ;（一）免疫标记技术 【概念或原理】： 利用荧光素、酶、胶体金、发光物质以及放射性核素等易显示物（标记物）连接于已知抗体或抗原，再去检测待测标本中的相应抗原或抗体的量或其存在与否。 优点：高度的敏感性和特异性，简便、快速，可作定性、定量或定位测定。 【分类】 荧光免疫技术 酶免疫技术→ELISA（双抗体夹心法 ） 放射免疫技术 金免疫技术→斑点免疫层析试验 化学发光免疫技术等 ;;17;tubercle bacillus with fluorescence;20; 酶免疫组化技术：组织（或细胞）中抗原定位 酶免疫测定(如ELISA)：测液体标本中抗原或抗体 ELISA (酶联免疫吸附试验，enzyme-linked immunosorbent assay) sandwich ELISA to detect Ag √ indirect ELISA to detect Ab competitive ELISA to detect Ag or Ab; 1）已知抗体包被 2）洗板 3）加待检抗原标本 4）洗板 5）加酶标记抗体 6）洗板 7）加底物显色，测定 (measure color) ;（一）免疫标记技术 1、酶联免疫吸附试验 (ELISA) ------双抗体夹心法;“ELISA双抗体夹心法”，第5步，1-7孔加不同浓度TNF-α标准品；后5孔加待检标本2孔、阴性对照1孔、空白对照（样品稀释液） 2孔；每孔100ul，37℃，30分钟：;5.加待检标本： 1-7孔加不同浓度TNF-α标准品；后5孔加待检标本2孔、阴性对照1孔、空白对照（样品稀释液） 2孔；每孔100ul，37℃，30分钟。 6.弃去酶标板内液体，按步骤2洗板三次。 7.每孔加100?l酶标记抗TNF单克隆抗体，置37℃湿盒30min。 8.弃去酶标板内液体，按步骤2洗板三次。 9.每孔加底物溶液100?l，37℃避光孵育15min。 10.每孔加终止液一滴（约50?l），终止反应。 11.观察显色反应，酶标仪在490nm处测定每孔OD值。 12.作标准曲线，计算待检标本TNF-α浓度。 【线性关系式：log(concentration)=a*log(OD)+b】;输入相应数据； 选中相应数据； ;在上方工具栏里选插入散点图，并选中第一个类型的散点图； ;选中插入的散点图，在工具栏里的图表布局里选中第三行最后一个； ;选中后可得到如下图表：;30;31;;（一）2、斑点免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA);; ;36;（一）2、斑点免疫层析试验; （二）免疫细胞功能测定 1、E花环试验 原理： T细胞表面有绵羊红细胞受体（E受体）(CD2)，若T细胞与绵羊红细胞共同孵育，T细胞周围吸附绵羊红细胞，为花环形成细胞，