第20讲第四章细胞工程制药(1).pptVIP

* 第四章 细胞工程制药 细胞工程概说 细胞技术在生物制药中的应用 细胞工程概说 细胞工程的定义与内涵 动物细胞工程及特点 植物细胞工程及特点 细胞固定化技术与细胞反应器 细胞工程的定义与内涵 细胞工程（Cell Engineering），也称细胞技术，是生物工程的主要内容之一。 它是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，通过细胞融合、核质移植、染色体移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 按照定义，发酵技术也属于细胞工程的范畴。因为发酵过程本身就是一个大规模微生物细胞培养技术，或者说所谓（动植物）细胞培养技术正是借鉴了传统发酵技术而发展起来的。 细胞工程的定义与内涵 　　　　　　细胞操作技术 　细胞融合 　细胞核移植 　细胞器移植 　染色体添加 　外源染色体导入 　胚胎移植 　细胞培养 　组织培养 细胞融合 在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。 有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合，即由两个配子融合形成一个新的的二倍体。 细胞核移植 所谓细胞核移植技术，就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。 1 供体核的获得 2 受体细胞的获得及其去核 3 核卵重组 4 细胞融合/激活 5 重构胚的培养与移植 细胞器移植 细胞工程的一项技术，将一个物种的细胞器分离出来，通过与另一物种的原生质体混合培养及原生质体的包饮作用，把细胞器摄入到细胞内，进行作物的遗传改良，目前研究较多的主要是叶绿体的摄入。 显微操作技术是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。 染色体添加 染色体工程（chromosome engineering） 按设计有计划削减、添加和代换同种或异种染色体的方法和技术。也称为染色体操作。 它不仅在改良植物的遗传基础培育新品种上受到重视，而且也是基因定位，和染色体转移等基础研究的有效手段。 ■ 胚胎移植 胚胎移植又称受精卵移植，俗称人工授胎或借腹怀胎，是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。 胚胎分割移植 是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。 细胞培养 原代培养 是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。 传代培养 原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。 组织培养 在无菌的条件下，将植物的器官或组织的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些组织器官就会进行细胞分裂，形成没有分化的一团薄壁细胞，叫愈伤组织。 在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素的条件下，愈伤组织开始分化，发育成一棵完整的植株。 动物细胞工程及特点 动物细胞结构及生理特点 没有细胞壁 成熟细胞难以脱分化 分裂周期长：12～48h 贴附生长，接触抑制 寿命有限：一般在50代左右 环境敏感 培养条件要求高：细胞生长因子 培养工艺不同于微生物或植物细胞 动物细胞工程及特点 动物细胞培养的基本程序 动物细胞工程及特点 动物细胞系 1．原代细胞系 　　直接取自动物组织、器官，经过粉碎、消化而获得的细胞。 2．二倍体细胞系 　　是原代细胞经过传代、筛选、克隆，从多种细胞成分的组织中挑选出来的具有某种特征的细胞株。 3．连续细胞系 　　是从正常细胞转化而来，分化不成熟的、获得了无限增殖能力的一种细胞。 4．基因工程细胞系 　　通过基因工程技术，把编码蛋白质的基因在分子水平上进行设计、改造、重组， 所获得细胞系。 冷冻保存 液氮温度（－196℃），保存10年以上。 －70～－80℃保存细胞，短期内对细胞的活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存