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关于参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP9和TIMP1蛋白表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：关于参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP9和TIMP1蛋白表达的影响 2 1 实验材料 2 2 实验方法 3 3 结果 5 4 讨论 5 文2：关于益肾通肺汤对实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织MMP9和TIMP1表达的影响 6 1 实验材料 7 2 实验方法 8 3 结果 9 4 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 关于参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP9和TIMP1蛋白表达的影响 文1：关于参芪补肺汤对肺气虚证慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重构中MMP9和TIMP1蛋白表达的影响 Key words：Shenqi Bufeitang；chronic obstructive pulmonary disease；lung-Qi deficiency syndrome；airway remodeling；metalloproteinase；rat 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是以不完全可逆性气流阻塞、气道慢性炎症和气道重构为特征的疾病。基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织型金属蛋白酶抑制物(TIMPs)与气道炎症修复重构密切相关。中医认为肺气虚是COPD发生的首要条件，且贯穿疾病始终。参芪补肺汤从《永类钤方》中的补肺汤化裁而来，是治疗肺气虚证稳定期COPD患者的有效方剂。本研究拟通过观察参芪补肺汤对肺气虚证COPD大鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1表达的影响，探讨其干预COPD肺气虚证大鼠气道重构的作用和机制。 1 实验材料 动物 清洁级雄性Wistar大鼠60只，体重180～200 g，购自重庆腾鑫生物技术有限公司(合格证号：)。动物饲养室为清洁级，控制温度15～5 ℃。 药物与试剂 参芪补肺汤(由黄芪30 g、党参15 g、补骨脂10 g、丹参30 g、百部10 g、桑白皮10 g组成)，贵阳中医学院第一附属医院药剂科提供，水煎2次浓缩为含原药材2 g/mL的药液。吸入用布地奈德混悬液，AstraZeneca公司产品，批号300229，购自贵阳医学院附属医院；木瓜蛋白酶，Sigma公司产品；兔抗MMP-9及TIMP-1多抗、即用型SABC免疫组化染色试剂盒均为武汉博士德公司产品；DAB显色试剂盒，北京中山公司产品。 主要仪器 超声雾化器，德国白瑞公司；自制透明塑料箱40 cm×40 cm×40 cm；RM 2016型轮转式石蜡切片机，上海徕卡仪器有限公司；BX51显微镜，日本Olympus。 2 实验方法 造模 采用《中医实验动物学》之“肺气虚证动物模型”复制法[1]，并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法[2]复制“肺气虚证”稳定期COPD模型大鼠。用刨花、锯末、烟叶各30～50 g，另加二氧化硫粉10 g，点燃烟熏，模型大鼠暴露于烟雾浓度300 ppm的烟室中，每日2次，每次1 h，并于造模开始后第30、32、34、36日将超声波雾化器与40 cm×40 cm×40 cm透明塑料箱相连，通过雾化管向箱中模型大鼠喷入浓度为%的木瓜蛋白酶，每5只大鼠2 mL。造模期60 d。 分组与给药 Wistar大鼠随机分为6组，每组10只。正常组：置于正常无烟环境中饲养，不予处理。模型组：造模1月后开始生理盐水灌胃10 mL/(kg·d)，同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补高组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃 g/(100 g·d)，相当于成人常规临床用量的4倍，同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补中组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃 g/(100 g·d)，相当于成人常规临床用量的2倍，同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；补低组：造模1月后开始给参芪补肺汤水煎剂灌胃 g/(100 g·d)，相当于成人常规临床用量等效量，同时雾化吸入生理盐水4 mL/d；激素组：造模1月后开始雾化吸入布地奈德4 mL/d( mg/mL)，同时灌服生理盐水10 mL/(kg·d)。以上治疗均每日1次，共30 d。 观察及检测指标 一般情况 观测大鼠的活动度、对外界反应的灵敏度、皮毛光泽、饮食、饮水、体重、死亡情况。 支气管肺组织形态学观察 大鼠处死后，取左肺上叶置于10%中性福尔马林溶液中固定。酒精梯度脱水，二甲苯透明标本，浸蜡，包埋，切片，HE染色。于光学显微镜下观察组织形态学改变，参照文献[3]用图像分析系统测量小支气管管