蛋白质组学硕士.pptVIP

a. 研究信号转导中蛋白质的翻译后修饰 针对蛋白质翻译后修饰主要为磷酸化，并且主要为丝/苏氨酸和酪氨酸磷酸化的特点，对外界因素（如：EGF、PDGF）刺激细胞的前后的细胞提取物，使用泛抗磷酸化丝/苏氨酸抗体或/和泛抗磷酸化酪氨酸抗体，特异性沉淀丝/苏氨酸或/和酪氨酸磷酸化蛋白分子，然后进行二维电泳或一维凝胶电泳分离，比较刺激前后的图谱，从而可以获得差异蛋白质点，再用质谱技术进行鉴定，最终可以获得刺激因子（如：EGF）介导的信号转到通路中的信号分子的磷酸化改变，即信号分子是否活化，这有助于获得某因子激活的信号分子和由此建立由其介导的信号转导通路。 可见，采用免疫共沉淀结合蛋白质组学高通量技术，有希望发现信号转导通路中的新的信号分子。 当前31页，共71页，星期一。 第三十一页，共七十一页。 b.研究信号转导中蛋白质的相互作用 信号转导通路是一连串的生化和分子事件，其中的信号转导分子的抑制或加强，均将影响下游蛋白质分子的活性或导致下游靶基因的表达改变，可以从中发信号转导通路中的下游分子，Lewis等结合功能蛋白质组学和ERK1/2的选择性活化或抑制以寻求MKK/ERK通路的稀有效应分子，发现25种MAPK通路下游效应靶蛋白分子，仅5种蛋白质为以前知道的MAPK信号转导通路相关的蛋白质。 c.研究信号转导中下游靶分子的研究 应用范围: 1）蛋白质，如蛋白质差异显示、蛋白质组作图和成分鉴定 2）基因，如功能基因组计划、基因产物识别、功能鉴定和调控机制分析等 3）重要生命活动的分子机制，包括细胞周期、细胞分化与发育、肿瘤发生与 发展等 4）医药靶分子寻找与分析 当前32页，共71页，星期一。 第三十二页，共七十一页。 研究技术： 双向凝胶电泳(2-DGE )和质谱(MS)是主要的技术: 蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离。 二维电泳可以将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率的分离。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离。电泳后对胶进行高灵敏度的染色如银染和荧光染色。如果是比较两种样品之间蛋白质表达的异同，可以在同样条件下分别制备二者的蛋白质样品，然后在同样条件下进行二维电泳，染色后比较两块胶。也可以将二者的蛋白质样品分别用不同的荧光染料标记，然后两种蛋白质样品在一块胶上进行二维电泳的分离，最后通过荧光扫描技术分析结果。 当前33页，共71页，星期一。 第三十三页，共七十一页。 胶染色后可以利用凝胶图象分析系统成像，然后通过分析软件对蛋白质点进行定量分析，并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。通过专门的蛋白质点切割系统，可以将蛋白质点所在的胶区域进行精确切割。接着对胶中蛋白质进行酶切消化，酶切后的消化物经脱盐/浓缩处理后就可以通过点样系统将蛋白质点样到特定的材料的表面（MALDI-TOF）。最后这些蛋白质就可以在质谱系统中进行分析，从而得到蛋白质的定性数据;这些数据可以用于构建数据库或和已有的数据库进行比较分析。 当前34页，共71页，星期一。 第三十四页，共七十一页。 ▲关于蛋白质组的研究，也可以将蛋白质组的部分或全部种类的蛋白质制作成蛋白质芯片，这样的蛋白质芯片可以用于蛋白质相互作用研究，蛋白表达研究和小分子蛋白结合研究。 ▲蛋白质组研究技术体系包括： ? 样品制备； ? 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gelelectrophoresis, 2-D PAGE)； ? 蛋白质的染色； ? 凝胶图像分析； ? 蛋白质分析； ? 蛋白质组数据库。 当前35页，共71页，星期一。 第三十五页，共七十一页。 其中三大关键： ① 双向凝胶电泳技术 ② 质谱鉴定 质谱分析原理图 ③ 计算机图像数据处理与蛋白质数据库 当前36页，共71页，星期一。 第三十六页，共七十一页。 质谱分析仪 当前37页，共71页，星期一。 第三十七页，共七十一页。 　原核及简单真核生物的蛋白质组研究　 流感嗜血杆菌的蛋白质组研究 大肠杆菌的蛋白质组研究　 致病微生物的蛋白质组研究 酿酒酵母的蛋白质组研究 当前38页，共71页，星期一。 第三十八页，共七十一页。 　流感嗜血杆菌的蛋白质组研究　　 流感嗜血杆菌(Hae mophilus influenzae)是第一个获得基因组全序列的生物.瑞士的一个小组通过2-DPAGE研究了流感嗜血杆菌的蛋白质组分,在ｐＨ3-10的范围内鉴定了约300个蛋白质组分,然后用有两个尿素浓度的麦黄酮(tricine)