《细胞与显微技术学》动物骨髓细胞染色体的制备.ppt

实验用品 1．器材：解剖器具、注射器（2ml） 、离心机、刻度离心管、玻璃吸管、载玻片、盖玻片、显微镜、恒温水浴锅等； 2．试剂 2mg/ml 秋水仙素溶液、固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075mol/l的KCl低渗溶液、Giemsa染液、磷酸缓冲液(PH7.2)、0.85%生理盐水等。 3．材料：青蛙 4、将细胞悬液转入1.5ml离心管中，以1000rmp离心10min，弃去上清液. 5、加入1ml KCL溶液，吸打混合均匀，37℃水浴低渗20min。（细胞膨胀，使滴片时细胞膜破碎，染色体分散） 6、预固定：加入2滴新鲜固定液，混匀，以1000rpm离心8min，弃上清。 7、去掉上清液，沿离心管壁缓慢、轻轻加入新鲜配置的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1ml，加固定液时注意不要冲动细胞团快。立即用移液器将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min后，1000rpm离心8min。 8、吸去上层固定液，视管底细胞多少加入少量新配制的固定液，将细胞团快轻轻吸打成悬液。（0.2-0.5mL） 9、在净、冷、湿的载玻片上，滴加1-3滴上层细胞悬液，在烘箱中烘干。 10、将玻片平放于支架上，细胞面向下，每片滴加Giemsa染液数滴，染色15min。 11、在自来水管下冲洗数秒，去掉染液，在烘箱中烘干，显微镜观察。 注意事项 1、低渗与离心等步骤的操作要轻。 2、固定液要现配且预冷，载玻片要提前泡在蒸馏水中预冷。 四、作业 绘制染色体图并作简要分析。 例如：细胞密度是否适中，分裂细胞的比例如何，处于分裂中期相的细胞数量情况，染色体形态、数目、有否重叠等。 * * 动物骨髓细胞染色体的制备 实验目的 掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备技术 观察染色体的数目以及形态特征 实验原理 在正常动物细胞中，骨髓是处于不断分裂的组织之一，骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂活性并且数量非常多。处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水酰胺处理后，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态，再经离心、低渗处理及固定、滴片、染色等步骤，便可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。 实验步骤 1、秋水仙素处理：实验前一天晚上，按照青蛙每克体重4ug的剂量，腹腔注射秋水仙素。 2、取股骨：将小鼠或青蛙处死，迅速取出股骨（为了获得较多的骨髓细胞胫骨亦可使用），用剪刀和纱布剥去全部肌肉，剪去两端的股骨头。 3、用1ml注射器吸取生理盐水1 ml ，将针头插入骨髓腔，将红骨髓细胞冲入表面皿内，反复几次，直至骨头变白，吸打骨髓细胞，使细胞团块分散。 滴片的制作 1m 青蛙骨髓细胞染色体核型（2n=26）