《细胞与显微技术学》人体barr小体的制片及观察.ppt

* * 人体barr小体的制片及观察 实验八 * * 一、实验目的 1．学习和掌握人体barr小体的制片技术； 2．观察barr小体； * * 巴氏小体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。 * * 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 * * 在人类，男性细胞核中很少或根本没有barr小体，而女性则有1个。 以后研究表明，barr小体就是x染色质异固缩（细胞分裂周期中与大部分染色质不同步的螺旋化现象）的结果。 体育运动会上的性别鉴定主要采用barr小体方法。 * * * * 二、实验原理 苯酚品红染液为碱性燃料，而染色体容易被碱性染料染成深色 * * 三、实验材料 人体口腔上皮细胞 毛囊细胞的根部 * * 四、实验器具和药品 实验器具：显微镜、载片、盖片、无菌牙签等。 实验药品： 1、1N或5N盐酸或浓盐酸和95％乙醇 1：1的混合液。 2、改良苯酚品红染色液。 * * 五、实验方法 （一）口腔粘膜细胞Barr氏小体显示方法 1、取材与固定：实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜(第一次的刮取物弃去)，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在空气中干燥。 2、染色与观察：用改良苯酚品红染液染色10－15分钟，倾斜载玻片，倒掉染液。用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液。放于显微镜下观察。 * * 统计barr小体的频率(可与男性细胞对照观察)。 制片时，一定刮取细胞膜、核膜完整的,细胞核未解体的口腔粘膜细胞。 注意 * * （二）发根毛囊细胞Barr氏小体显色方法 1、取材：取带有发根的头发，围绕发根部的1圈长2-3mm的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液。约10min以后，可使毛囊细胞得到充分软化。以清水冲洗2-3遍，将酸解液冲洗干净。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。 * * 2、染色：可滴加1滴染液于待测细胞上，注意染液不可过多，以免细胞流失。约10min后，加盖玻片即可进行观察。 * * 注意 一根发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。 观察时又可以看到清晰的单层涂布细胞，便于观察统计。 取清洁的毛囊。 盐酸清洗干净。 * * 毛囊细胞 * * 女性细胞1 口腔粘膜细胞 * * 六、实验作业 描述巴氏小体的形态及分布