莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的血清药理学分析.docVIP

莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的血清药理学分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的血清药理学分析 1 1 材料与方法 2 2 结果 5 3 讨论 6 文2：清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学分析 7 1 实验材料 8 2 实验方法 9 3 统计学方法 11 4 结果 11 5 讨论 12 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的血清药理学分析 文1：莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的血清药理学分析 Abstract：Objective To explore the apoptotic effect of Eqi compound prescription (contained-herb serum) on cute myelocytic leukemia HL-60 cell， which is relative to intracellular Ca2+， Caspase-3 and Bcl-2. Methods According to serum pharmacology， HL-60 cells were exposed to 10% concentratio of contained-herb serum for 24， 48， 72 and 96 hou respectively. Cells were observed under a fluore- scence microscope. SubG1 DNA was examined by flow cytometer. Intracellular Ca2+ concentration was measured by fura-2 fluorescence load method. Caspase-3 enzymatic activity were measured by colorimetry. Bcl-2 gene expression were measured by LSAB. Results The contained-herb serum could induce apoptosis of HL-60 cells. Intracellular Ca2+ concentration of treatment with Eqi was higher evidently than that of control (P Key words：Eqi compound prescription；acute myelocytic leukemia；apoptosis；Caspase-3；Bcl-2 越来越多的研究表明，细胞内Ca2+水平升高与诱发细胞凋亡密切相关[1]。细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性变化对凋亡的诱导起重要促进作用[2]。Bcl-2 是重要的抑凋亡基因之一，过度表达Bcl-2的急性白血病细胞抑制凋亡[3]。本实验主要观察莪芪抗瘤方剂(含药血清)对白血病HL-60细胞内Ca2+浓度、促凋亡基因Caspase-3活性及抑凋亡基因Bcl-2表达的影响，探讨其可能的作用机制。 1 材料与方法 动物 日本大耳白兔，雄性，体重～3 kg，兰州医学院实验动物室提供。 药物 莪芪抗瘤方剂由莪术、三棱、黄芪、女贞子等药物组成，甘肃省药材公司饮片厂提供，按工艺制成每1 mL含原药材5 g的浸膏，4 ℃保存备用。 含药血清的制备 以纯种雄性日本大耳白兔10只，每日给予含莪芪抗瘤方剂浸膏10 g/kg灌胃，另设3只为对照组(生理盐水组)。连续10 d，于最后一次灌药后1 h(灌药前禁食、不禁水12 h)，心脏采血并分离血清，经56 ℃、30 min灭活，无菌过滤后，置-20 ℃冰箱保存备用。 细胞培养 HL-60细胞由兰州医学院血液病研究所传代保存，采用常规培养。培养液为含10%的小牛血清，青、链霉素各100 U/mL的RPMI-1640，在37 ℃、饱和湿度、5% CO2孵箱中培养，每2～3 d换液传代培养。 细胞形态学观察 参照文献[4]方法略加改动，将细胞以1×104接种于96空板中，24 h细胞贴壁后，弃上清。加入10%的含药血清培养基处理细胞，另设未加药对照组。每12 h收集对照及药物处理组细胞，离心涂片，用无水乙醇固定10 min后，加 μg/mL吖啶橙染色30 min，于荧光显微镜下观察细胞染色质及RNA变化并拍照。 流式细胞术分析 参照文献[5]略加改动，离心收集1