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微卫星标记在长江江苏段鲢增殖放流资源贡献率的讨论分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：微卫星标记在长江江苏段鲢增殖放流资源贡献率的讨论分析 1 1、材料与方法 3 2、结果与分析 5 3、讨论 6 4、小结 10 文2：长江江苏段综合水上服务区建设初探 11 一、什么是水上服务区 11 1、基本功能 12 2、拓展功能 12 二、为什么要建设综合水上服务区 13 1、水上综合服务区具有集约性 13 2、水上综合服务区具有环保性 14 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 微卫星标记在长江江苏段鲢增殖放流资源贡献率的讨论分析 文1：微卫星标记在长江江苏段鲢增殖放流资源贡献率的讨论分析 近年来，由于国家对长江资源保护力度加强，以“四大家鱼”为主的人工增殖放流使得渔业资源下降问题得到缓解．增殖放流是指将人工繁育苗种或采集到的野生苗种投放到自然水域中，突破自然种群的更新限制(recruitment limitation)，修复受损水域生态系统中的生物资源，提高渔业资源产量[1]．科学的增殖放流活动是有效的生态补偿措施，在维持水域生态系统平衡、促进水生生物资源恢复[2]、实现可持续的渔业生产[3]和减缓水利工程对鱼类的负面影响[4]等方面有重要作用． 鲢(Hypophthalmichthys molitrix)是我国“四大家鱼”之一[5]，广泛分布于我国各大水系和湖泊[6]．长江鲢增殖放流活动已开展多年，放流规模越来越大，但有关鲢增殖放流资源贡献率评估的研究较少．李小芳[7]对2010年和2011年湖北江段放流亲鱼的遗传效果进行评估，并确定2年对卵苗发生量的贡献率分别为%、%;王军红等[8]对2010-2012年长江三峡大坝至葛洲坝江段经济鱼类(鲢为主要放流和标记物种)增殖放流进行评价，确定3年回捕率分别为%、0、%．自此以后，很少有学者对鲢增殖放流资源贡献率展开针对性的研究．目前，评估增殖放流资源贡献率的主要方法有基于生物学统计数据的“放流效果统计量评估法”[9]和“标记放流回捕技术”[10，11，12，13，14]．微卫星标记(microsatellite marke)作为多态性高的分子标记，被广泛应用于动物的亲缘和家系鉴定、群体遗传信息研究和遗传育种等方面[15，16，17]．成熟的微卫星标记技术已适用于水生生物增殖放流资源贡献率评估和鱼类洄游路线研究[18，19] 鲢作为长江下游增殖放流的主要放流物种，对其增殖放流资源贡献率的评估具有代表性，一定程度上能反映放流物种整体的资源贡献率．本研究利用SSR荧光标记技术，标记8个主要原良种场(为江苏省各地政府放流工作提供苗种的单位)鲢亲本群体，结合亲子鉴定技术，评估2016-2017年增殖放流对长江江苏段鲢资源的贡献率．本次研究首次对长江下游大规模放流物种鲢资源贡献率进行评估，研究结果将为今后的增殖放流评估工作提供重要的参考依据． 1、材料与方法 样品采集 2016-2018年，共采集鲢鳍条样品1096尾．其中，2016年3月至2017年12月，采集江苏省8个原良种场鲢亲本鳍条621尾，见表年，8个原良种场孵化的鲢幼苗陆续被放流到长江下游的9个江段(南京、镇江、扬州、扬州、泰州、靖江、江阴、张家港、如皋，位于江苏省)，放流情况见表2．放流3个月后，在1年的时间里从长江下游4个江段(镇江、靖江、张家港、常熟，距离其他省份较远，可避免其他省份增殖放流影响)陆续捕捞475尾鲢．非致命取样剪取活鱼的尾鳍，无水乙醇(江苏联海生物科技有限公司)保存，采样和放流位点见图1。 DNA提取与PCR反应 采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(北京天根生物技术有限公司)提取鳍条组织基因组DNA提取的基因组DNA按照常规方法检测其质量，提取成功后，置于-20℃下保存． 11对荧光微卫星引物选取参照谭照君等[20]，由上海睿迪生物科技有限公司合成，见表3。 10μL PCR反应体系:5μL PremixTaq(Takara Taq Veion plus dye)(Takara，宝生物工程有限公司)，μL上下游引物稀释液，1μL DNA稀释液，μL去离子水． PCR反应程序设定:94℃预变性120 s;94℃变性20 s，-59℃退火20 s;72℃延伸20 s;72℃延伸600 s;4℃保存，反应循环30次． 表1 8个原良种场和4个长江江段鲢采样数量 表2长江江苏段主要的9个放流地点鲢放流数量 图1原良种场、长江采样位点(a)和主要放流位点(b) 采用聚丙酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamide Gel Electrophor