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血管性痴呆大鼠记忆力及GAT1CREB表达应用银杏叶提取物的疗效观察 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：血管性痴呆大鼠记忆力及GAT1CREB表达应用银杏叶提取物的疗效观察 1 1、资料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：大鼠血管性痴呆模型 7 1 材料与方法 8 2 结 果 9 3 讨 论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 血管性痴呆大鼠记忆力及GAT1CREB表达应用银杏叶提取物的疗效观察 文1：血管性痴呆大鼠记忆力及GAT1CREB表达应用银杏叶提取物的疗效观察 血管性痴呆（VD）是由各种脑血管疾病因素引起脑组织受损、脑循环障碍、而导致的智能损害综合症[1]。氧化应激（OS）是由于机体内发生氧化与抗氧化失衡，从而引起细胞、组织的氧化损伤，其在血管性痴呆的发生与发展的每一个环节中都发挥重要作用[2，3]。奥拉西坦（OX）是环羟基氨基丁酸的衍生物，可有效改善血管性痴呆症状，可促进磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇的合成，增加神经细胞的蛋白质与核酸的形成作用，但是该药临床应用的长期疗效不佳[4，5]。银杏叶提取物（GBE）是一种传统而廉价的中草药，化学成分复杂，是从干的银杏树叶子内提取的药用成分，具有调节血管活性、清除自由基、抗氧化、抗血小板凝聚、调节血管活性等多种作用[6，7]。γ-氨基丁酸转运体-1(GAT-1）与cAMP反应原件结合蛋白（CREB）是脑内重要的抑制性神经递质，在阻断兴奋扩散和传导过程中发挥重要作用[8，9]。本文为此具体探讨了银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠记忆力及GAT1、CREB表达的影响，以明确银杏叶提取物的作用效果与机制。 1、资料与方法 研究对象 SPF级成年雄性SpragueDawley(SD）大鼠（30只）购自北京维通利华实验动物技术有限公司（动物许可证编号，4-5周龄，体重140g-160g，饲养环境：温度在22℃-24℃，相对湿度40%-60%，食水自由，12/12h光照黑暗循环）；奥拉西坦（国药准字H，青岛金峰制药有限公司）；银杏叶提取物标准品（中国食品药品检定研究院，中国）。酶联免疫检测试剂盒（宝生物工程有限公司，中国），抗GAT1抗体与抗CREB抗体（Sigma公司，美国），氯仿、异丙醇（国药集团），无水乙醇（川东化学试剂厂） 动物分组与处理 所有大鼠都采用了改良双侧颈总动脉分次结扎的方法制备大鼠血管性痴呆模型，具体措施如下：用浓度为3%的戊巴比妥钠注射液（体重40mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，沿大鼠颈正中线切口切开皮肤，分离双侧颈总动脉与迷走神经。采用0号手术线从血管下穿过，将右侧颈动脉结扎。缝合颈部手术切口并腹腔注射青霉素注射液10万，放回笼中常规饲养。3d后拆除颈部手术线，进行大鼠左侧颈动脉结扎并进行缝合。造模成功标准：跨越平台时间（逃避潜伏期）显著延长，跨越平台次数显著少于正常大鼠，精神变差，反应迟钝。实验过程中，无大鼠死亡。 把造模成功的大鼠随机分为三组-对照组、奥拉西坦组与银杏组，每组各10只大鼠。对照组造模成功后给予生理盐水10mg/kg·d静脉注射，连续2周。奥拉西坦组在造模成功后给予奥拉西坦10mg/kg·d尾静脉注射，连续2周。银杏组大鼠造模成功后给予银杏叶提取物10mg/kg·d尾静脉注射，连续2周。每次给药过程中，每只大鼠均更换经高压灭菌后导管帽及注射内针，预防感染。 观察指标 (1）在造模后1d、7d与14d进行水迷宫实验，记录逃避潜伏期。在水迷宫装置自动记录大鼠从入水到寻台成功的时间，即逃避潜伏期，如120s大鼠仍未找到平台，则潜伏期为120s。（2）在造模后14d处死大鼠，迅速分离双侧的海马组织，迅即放入液氮中冷冻，于4℃下1000rpm，离心15min，取上清液，采用酶联免疫法检测海马组织IL-1β、IL-6的含量。（3）取海马组织的样本，提取总蛋白，采用Westernblot法检测GAT1、CREB蛋白相对表达水平，以β-actin作为内标。（4）取处死大鼠的颈动脉组织，制成病理切片，进行HE染色。然后选择3个含血管组织丰富的区域进行计数，取平均值。 统计学方法 选择软件进行数据处理，计量数据选择均数±标准差进行表示，计数数据采用百分比进行表示，本研究多组间数据对比用one-wayANOVA分析，两两比较用t-test分析与卡方分析等，P为差异具有统计学意义。 2、结果 逃避潜伏期对比 三组造模后1d的逃避潜伏期对比差异无统计学意义（P），银杏组与奥拉西坦组造模后7d、14d的逃避潜伏期低于对照组，银杏组低于奥拉西坦组，对比差异都有统计学意义（P），见表1。 表1三组造模后不同时间点的逃避潜伏期