某三甲医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌CRAB耐药基因携带情况及同源性.docVIP

某三甲医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌CRAB耐药基因携带情况及同源性 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：某三甲医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌CRAB耐药基因携带情况及同源性 1 1、材料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：我院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药监测 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 某三甲医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌CRAB耐药基因携带情况及同源性 文1：某三甲医院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌CRAB耐药基因携带情况及同源性 鲍曼不动杆菌是一种非发酵的革兰阴性杆菌，是医院感染重要致病菌之一[1]。AB可存在于正常人体皮肤、呼吸道、泌尿道以及自然环境中，常导致菌血症、肺炎、脑膜炎、腹膜炎、心内膜炎，以及泌尿道和皮肤软组织感染。近年来抗菌药物的滥用，侵袭性操作不规范等因素导致AB检出率及耐药率逐年增加，甚至造成AB医院感染流行[2]。耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌是指对亚胺培南或美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药的AB[3]，目前认为产碳青霉烯酶是AB对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因[4]。为了解该院CRAB耐药基因携带情况及其医院感染的可能途径，收集该院CRAB，采用聚合酶链式反应(PCR)进行耐药基因检测，脉冲场凝胶电泳进行同源性分析，以期为临床合理应用抗菌药物，制定AB医院感染防控措施提供参考依据。 1、材料与方法 菌株来源 收集该院2017年10月—2018年10月分离的CRAB，剔除同一患者分离的重复菌株。分离菌株经全自动微生物鉴定及药敏仪进行鉴定及药敏试验，部分药敏试验及复核采用纸片扩散法(K-B法)，药敏结果依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)2018版判断。以大肠埃希菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853，产酶大肠埃希菌ATCC35218，肺炎克雷伯菌ATCC700603为质控菌株。 主要试剂及仪器 PCR试剂盒，FTA○Rfor Bacterial DNA(美国Whatman○R公司)。2×TaqPCR Green ix、GenGreen核酸染料、DL2000DNAMarker、DNA快速纯化/回收试剂盒均为北京鼎国昌盛生物技术有限公司产品。PCR反应引物由上海生工生物工程有限公司合成。VITEK-MS、VITEKCompact均为法国生物梅里埃公司产品，药敏纸片为英国Oxoid公司产品。还包括超净工作台(苏州净化设备有限公司)、游标卡尺(上海精益仪器厂)、微量移液器(Eppendorf)、细菌比浊仪(法国生物梅里埃公司)、PCR仪(BIO-RAD)、电泳仪(北京六一仪器厂)、UV凝胶成像紫外分析仪(北京君益东方电泳设备有限公司)、紫外透照台(上海山富科学仪器有限公司)、微波炉(美的集团有限公司)、压力蒸汽灭菌器(山东新华医疗器械有限公司)、脉冲场凝胶电泳仪(美国Bio—Rad公司) 耐药基因检测 用FTA卡提取各株细菌的DNA，所用引物见表1，PCR扩增体系为:2×μL，DNA模板μL，上下游引物各1μL，ddH2O8μL，共25μL。基因扩增条件:94℃预变性5min，94℃变性60s，55℃退火45s，72℃延伸60s，72℃终止延伸5min，共30个循环。将扩增后的产物置于电泳仪中进行电泳，条件为60V，时间1h，电泳后放入凝胶成像系统观察并拍照记录。 同源性检测 将CRAB分离培养后，用比浊仪调成OD值为～的菌悬液，加入1%SeakemGoldSDS胶制备胶块，再用蛋白酶K进行裂解消化，纯水洗涤2次，再用TE洗涤4次，每次15min左右。使用ApaI内切酶进行酶切，37℃水浴中孵育4h。在脉冲场凝胶电泳仪中进行PFGE，电泳参数为5～20s，14℃，120°脉冲角度电泳19h，电泳结束后进行核酸染色，放入凝胶仪中进行观察并拍照保存。 表1耐药基因PCR引物序列及产物长度 数据分析 将凝胶成像仪保存的图像导入BioNumerily软件进行处理分析，以Dice系数计算出各菌株之间的相似性系数[5]。SD=2nxy/(nx+ny)，其中nx代表菌株X的总条带数，ny代表菌株y的总条带数，nxy为菌株xy共有的条带数，SD反映的是菌株相似度，范围在0～1之间，0代表完全不一样，1代表完全相同，相似性系数80%为分型界值，相似度≥80%为同一亚型，相似度80%为不同基因型。 2、结果 一般资料 共收集40株CRAB，分离自40例患者的标本。标本来源分别为血管导管尖端(9株)、引流液(5株)、血(5株)、支气管灌洗液(5株)、尿(4株)、分泌物(4株)、痰(4株)、脑脊液(2株)、腹腔积液(1株)、胆汁(1株)，28株CRAB来自于重症监护病房