禽源大肠杆菌耐药性消除作用受艾叶提取物的影响探究.docVIP

禽源大肠杆菌耐药性消除作用受艾叶提取物的影响探究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：禽源大肠杆菌耐药性消除作用受艾叶提取物的影响探究 1 1、材料与方法 2 2、结果与分析 5 3、讨论 6 文2：探究未来电子商务发展受云计算的影响 8 1 电子商务的现状和未来 8 2 云计算的概况 9 3 云计算对未来电子商务的影响探究 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 禽源大肠杆菌耐药性消除作用受艾叶提取物的影响探究 文1：禽源大肠杆菌耐药性消除作用受艾叶提取物的影响探究 大肠杆菌(Escherichiacoli)广泛分布于自然界，血清型有上万种之多，既是肠道的主要栖息菌又是常见的肠道病原菌。禽大肠杆菌病是指由禽致病性大肠杆菌引起的不同类型疾病的总称，主要症状包括禽类急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、关节炎、卵黄性腹膜炎等，是集约化养禽场常发的细菌性传染病，也是引起仔禽死亡的重要原因之一，对养禽产业造成较大经济损失[1]。抗生素被广泛应用于动物性疾病的治疗，长期的不合理应用使细菌的耐药性问题日趋严重。大肠杆菌是由质粒介导产生耐药性的细菌之一，可携带含有多种耐药表型的耐药质粒，并通过接合、转化、转导等方式在不同菌株之间传递，使得耐药性在细菌间快速播散，呈现出多重耐药、耐药率高、耐药范围广的特点[2]。其耐药形势越来越严峻，给疾病防治带来困难。 艾叶性温味苦、具有平喘止咳，去瘀散寒、抗毒消炎等功效。艾叶化学成分较为复杂，其主要成分为挥发油，油中含有桉油素、β-石竹烯、一萜品烯醇、芳樟醇等，此外含有黄酮类、鞣质类、多糖类等物质，研究表明，艾叶具有良好的抑菌杀菌作用[3]。本试验用艾叶的水提物和醇提物，作用于多重耐药的鸡源大肠杆菌，研究其抑菌效果，比较不同提取物对逆转大肠杆菌的作用，为中药防控禽源多重耐药菌的感染与流行奠定基础。 1、材料与方法 药物与主要试剂 艾叶，由河南省张仲景大药房股份有限公司提供;M-H(B)培养基(即水解酪蛋白肉汤培养基)、M-H(A)培养基(即水解酪蛋白琼脂培养基)、LB琼脂，均购自北京奥博星生物技术有限责任公司;%NaCl注射液，山东齐都药业有限公司;2，3，5-三苯基氯化四氮唑，国药集团化学试剂有限公司;药敏纸片由杭州微生物有限公司提供;60/90mm平板，泰兴市万通医疗器械厂。 供试菌种 禽源大肠杆菌菌株来源于规模养禽场临床分离，已完成耐药性检测，编号DRE1、DRE2、DRE3，质控菌株大肠杆菌ATCC25922，购自中国医学菌种保藏管理中心。 供试品的制备 冷冻保存的大肠杆菌质控菌株、3株大肠杆菌分离株(DRE1、DRE2、DRE3)分别接种至平板上，37℃温箱培育18h进行活化。无菌条件下取1环活化菌接种至M-H(B)肉汤，37℃震荡培养24h，校正浓度至×108CFU/mL，用生理盐水稀释至×106CFU/mL备用。 艾叶水提物的制备:称取100g艾叶，浸泡于800mL水中过夜，武火煎煮，待其沸腾后文火煮30min，8层纱布滤渣，药渣加200mL蒸馏水煮30min，合并2次滤液浓缩至100mL，抽滤，1000min离心10min，取上清液[4]。110℃、20min高压灭菌，置于4℃冰箱中备用。 艾叶醇提物的制备:按文献[5]的方法制备醇提物，合并滤液后置于蒸发皿内，加热挥发酒精至析出结晶，收集烘干，于4℃冰箱中备用。 艾叶水提物以生理盐水在试管中进行2倍梯度稀释，质量浓度依次为500、250、125、、/mL，分别取水提物10mL与M-H(A)培养基10mL混匀后倒入90mm平板，平板中药物浓度依次为250、125、、、/mL，同时做不含药物的M-H(A)平板为空白对照。 艾叶醇提物以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂进行梯度稀释，质量浓度依次为、、、、/mL，-H(A)培养基的试管中，混匀后倒入60mm的平板，使药物的终浓度为25、、、、/mL，同时做不含药物的空白对照和只含有等剂量DMSO的对照平板。 最小抑菌浓度(MIC)的测定 以琼脂稀释法进行MIC的测定，在无菌操作台中，取已制备好的4种菌液各2μL，分别点种至含不同浓度水提物或醇提物的平板上，培养16～18h后取出，在平板上各点种细菌处加%TTC10μL，置于37℃温箱培育～2h后观察结果。点种处出现红色代谢产物表示细菌生长;细菌未生长平板中最小的药物浓度即为该药物对该种细菌的MIC。 中药耐药消除试验 以耐药株的亚抑菌浓度(即1/2MIC)艾叶水提物及醇提物进行耐药消除试验。在无菌试管中用LB肉汤把药液浓度稀释至1/2MIC，同时设立不加药物的空白对照组;将新鲜培养的3株临床耐药株及