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广西mdash部分规模猪场主要呼吸道疫病流行的调查研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：广西mdash部分规模猪场主要呼吸道疫病流行的调查研究 1 1、材料与方法 2 2、结果与分析 4 3、讨论 6 文2：黔东南州规模猪场伪狂犬病免疫状况调查研究 10 1、 材料 10 2、 结果 11 3、 结论 12 4、 讨论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 15 正文 广西mdash部分规模猪场主要呼吸道疫病流行的调查研究 文1：广西mdash部分规模猪场主要呼吸道疫病流行的调查研究 近年来，养猪产业逐渐走向规模化集约化，饲养密度越来越大，各国家各地区间贸易往来增多，猪呼吸道疫病在世界范围内广泛危害养猪业。上世纪90年代初，我国从国外引进种猪，从此多种呼吸道疾病传入中国并开始大范围流行，而我国的疫苗研制等综合防治措施比较落后，如今猪呼吸道疫病已经上升为规模化猪场的主导疾病，发病率为30%～80%左右，死亡率极高，造成了极大的经济损失[1]。呼吸道疫病多发生于断奶仔猪、育肥猪、保育猪和母猪等，病猪多表现为发热、咳嗽、呼吸困难、体温升高和体重下降等，病死猪剖检可见明显的肺部病变[2，3]。规模猪场中猪的呼吸道疫病病因复杂，通常伴随着多种病原的混合感染和继发感染[4，5，6]。病原主要包括猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRV)、猪圆环2病毒(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪肺炎支原体(Mhp)和胸膜肺炎放线杆菌(APP)等原发性感染病原和副猪嗜血杆菌(HP)等继发性感染病原[2，3，7]。原发性感染病原侵入呼吸道和肺脏后，破坏呼吸道的防御屏障，造成猪呼吸道的抵抗力下降，猪体内的内源性继发病原体和环境中的外源性继发病原体进入呼吸道，引发继发性混合感染，暴发呼吸道疫病[2，3，8，9，10]。感染的病原不同靶器官也会不同，多种病原混合感染则造成多种病理变化，因此使得呼吸道疫病的临床诊断极为困难[6]。猪呼吸道疫病在我区猪场中普遍存在，对养猪业的发展造成了极大的影响[3]。为掌握广西地区猪场主要呼吸道疫病的流行情况，广西兽医研究所病毒研究室于2015年3月至2019年2月采用RT-PCPCR方法和细菌分离技术对广西地区14个地市猪场送检的1114份具有呼吸道症状病猪样品进行CSFV、PRV、PCV2、PRV、Mhp、HP和APP等7种疫病病原检测，并分析病原阳性率在不同年份、不同季节之间的差异及病原混合感染的情况，为广西地区主要猪呼吸道疫病的防治提供科学依据。 1、材料与方法 材料 1114份具有呼吸道症状病猪样品为被动送检样品，分别于2015年3月至2019年2月采集自广西14个地市规模猪场具有呼吸道症状病猪，其中南宁438份、玉林253份、桂林84份、贵港54份、百色47份、柳州43份、崇左39份、贺州32份、河池29份、北海27份、钦州23份、防城港19份、来宾18份和梧州8份。 DL2000DNAMarker、2×TaqPCRMasterMix、反转录试剂盒(PrimeScriptRTreagentKit)均为大连宝生物工程有限公司产品;病毒基因组DNA/RNA快速抽提试剂盒为Axygen生物科技有限公司产品。 将送检具有呼吸道症状病猪的肺脏、肾脏、脾脏、肝脏、心脏和淋巴等组织样品分别无菌操作接种于TSA血清琼脂、普通营养琼脂、麦康凯琼脂以及加有NAD的胰蛋白胨大豆营养琼脂等不同培养基平板，置37℃分别进行需氧与厌氧培养，24～48h后观察生长情况及菌落特征，并取菌落进行革兰染色涂片进行镜检。 方法 根据GenBank中公开发表的各病毒的基因序列，利用MegAlign(DNAStar)，软件设计引物(表1)，上述引物均送至生工生物工程(上海)股份有限公司合成。 、病毒DNA/RNA提取和细菌DNA模板的制备 取送检具有呼吸道症状的病猪肺脏、肾脏、脾脏、淋巴等组织样品，按1∶5加入生理盐水，在组织研磨器内进行研磨，反复冻融3次，4℃条件下10000min离心5min后取上清，进行DNA/RNA抽提或保存于-70℃冰箱备用。按照AxyPrepBodyFluidViralDNA/RNAMiniprepKit使用说明书对样品上清进行DNA/RNA提取，所获得的DNA/RNA直接进行PCRT-PCR或置于-70℃保存。挑取细菌培养基疑似菌落，悬浮于10μLPBS中，95℃水浴10min，5000min离心1min后取上清作为DNA模板，所获得的DNA模板直接进行PCR或置于-70℃保存。 表1引物信息 .1CSFV和PRV的RT-PCR检测 利用特异性引物对提取的样品