探究猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的变异情况（生物学资料）.docVIP

探究猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的变异情况（生物学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 2 文1：探究猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的变异情况 2 1、材料与方法 3 2、结果与分析 6 3、讨论 9 文2：病毒基因的检测医学论文 10 一乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)测定 10 【参考值】 10 【临床意义】 10 【注意事项】 11 二其他病毒DNA测定 11 (一)人乳头瘤病毒DNA(HPV-DNA)检查 11 【参考值】 11 【临床意义】 11 【注意事项】 12 2.标本采集应严格按无菌操作，避免污染。并及时送检。 12 (二)人类巨细胞病毒DNA(HCMV-DNA)检查 12 【参考值】 12 【临床意义】 12 1.用于临床HCMV感染的快速诊断。 12 【注意事项】 13 【参考值】 13 【临床意义】 13 1.血清用无菌注射针头抽取静脉血2ml于无菌肝功管中。 14 3.脑脊液抽取脑脊液于无菌玻璃瓶中。 14 (四)EB病毒DNA(EBvirus，EBV-DNA) 14 【参考值】 14 【临床意义】 14 【注意事项】 14 2.标本采集时严格按无菌操作，并及时送检。 15 三RNA病毒测定 15 【参考值】 15 【临床意义】 15 1.有助于HCV感染的早期诊断。 15 【注意事项】 15 参考文摘引言： 16 原创性声明（模板） 17 文章致谢（模板） 17 正文 探究猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的变异情况（生物学资料） 文1：探究猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的变异情况 猪繁殖与呼吸综合征可引起任何品种、性别、年龄的猪发病，其中易感性最高的是母猪和仔猪，且感染后出现严重的临床症状[1]。PR是导致母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、弱仔等繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为主要特征的传染病[2]。目前猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRV)分为2个基因型:基因型1和基因型2，代表性毒株分别为欧洲型LelystadVirus和美洲型VR-2332[3]。中国内陆于1995年首次发现PRV，并在1996年成功分离出第1株PRV毒株CH-1a[4];2006年，中国南方地区出现由变异性毒株引起的高发病率和高死亡率的疫情[5，6]，随后蔓延至全国大部分地区，给我国养猪业造成了严重的经济损失。 PRV为单股正链RNA有囊膜病毒，基因全长约为15～[7]，至少含有10个开放阅读框(ORF)，包括ORF1a、ORF1b、ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4、ORF5、ORF5a、ORF6和ORF7[8]。在ORF1a中的P2基因最容易变异，主要含3个区域:N末端的半胱氨酸酶区、中部的高变区和C末端疏水的转膜区，P2发生的变异主要位于中部的高变区[9]。P2区域在许多PRV分离毒株中存在氨基酸缺失，这是PRV基因组长度差异的一个主要原因。ORF5编码的糖基化囊膜蛋白GP5有较强的免疫原性，可诱导机体产生中和抗体，常被作为构建PRV诊断的重要靶标[10]。GDZS2016为近年来广东地区流行毒株，与JXA1毒株在同一分支，相关文章报道其能造成临床发病率为90%，死亡率为10%，不具有感染Marc-145细胞的能力，但可感染PAM细胞[11]。PRV发生基因重组的频率很高，可能导致新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRV)的出现[12，13] 2018年7月，本实验室从广东省江门市某PR发病猪场采集肺脏组织样本，PCR检测结果为PRV阳性，在Marc-145细胞上无法分离纯化，最终在原代猪肺泡巨噬细胞上成功分离，将其命名为GDjm株。对全基因组进行测定，将测序结果与其他代表PRV毒株进行序列比对和进化树分析，进而分析GDjm毒株与国内流行的PRV毒株的相似性和重组情况，为深入研究该病毒株的遗传与变异奠定了基础。 1、材料与方法 病料 肺脏病变组织来源于广东省江门市疑似发生PR某养殖场，-20℃冻存备用。 细胞、菌体 Marc-145细胞、PAM细胞、大肠杆菌感受态细胞，由华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心种猪疾病防控实验室保存。 主要试剂 病毒DNA/RNA提取试剂、反转录试剂盒以及胶回收试剂盒盒购自Promega公司;RT-PCR相关试剂盒购自Vazyme公司;DNAMarkerDL2000等购自广州东盛生物科技有限公司;EB替代染料(GoldviewⅠ)购自广州华奇盛生物科技有限公司;pEASY-BluntSimpleCloningVector购自北京全式金