胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用（医学资料）.docVIP

胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用（医学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 6 文2：丹参注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤肾功能的影响 7 1 材料与方法 8 2 结 果 9 3 讨 论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用（医学资料） 文1：胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用 急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是临床上常见的危重病症，由多种病因导致[1]。AKI因其较高的死亡率而具有重要的临床意义，至今仍然有30%～70%不等[2]。肾脏缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury，IRI）是导致AKI的重要因素之一，常发生在肾移植、保留肾单位手术、肾动脉狭窄、肾积水、主动脉搭桥手术、体外循环、栓塞性疾病、意外或医源性损伤中等。目前，用于减轻肾IRI的措施主要分为三类：药物干预、外科或机械性干预和基因治疗等，而寻求一种有效、廉价的措施，势必会产生较大的经济和社会效益。胡黄连根提取物含有多种萜类化合物和糖苷[3]，胡黄连苷Ⅱ是提取物的主要活性成分之一。许多研究表明，胡黄连苷Ⅱ有大量的药理作用，包括神经保护、肝脏保护、抗炎、抗凋亡、免疫调节等作用[4-5]，对心、脑和肢体IRI均有保护作用[6-9]。然而，其在肾IRI中的作用研究缺乏，因此笔者欲研究胡黄连苷Ⅱ在肾IRI中的作用及其机制。 1 材料与方法 模型的建立与分组 健康雄性SD大鼠30只，8～10周龄，购自武汉大学医学院实验动物中心（合格证号：），体重为250～300 g，实验前适应性喂养1周，自由饮水、进食。采用随机数字表法将大鼠分为以下3组：①假手术组（n = 10）：腹腔注射20 g/L戊巴比妥钠（40 mg/kg），麻醉大鼠，然后游离双侧肾脏，切除右肾后缝合腹壁；②缺血再灌注组（n = 10）：手术步骤与假手术组相同，但在游离双侧肾脏及切除右肾后，用无创伤血管夹夹闭左肾动、静脉45 min进行缺血，然后开放血管夹进行再灌注24 h（既往文献研究表明再灌注24 h是研究肾脏缺血再灌注急性损伤的最佳时间点），肾脏由暗红变色鲜红色代表再灌注成功。③胡黄连苷Ⅱ组（n = 10）：手术步骤与缺血再灌注组相同，但在缺血45 min后、再灌注之初腹腔注射（关于胡黄连苷Ⅱ对器官缺血再灌注损伤的文献报道均采用的是腹腔注射）Picroside Ⅱ（10 mg/kg），而假手术组和缺血再灌注组注射等量的1 mol/L的PBS。 试剂 胡黄连苷Ⅱ购于天津奎青医药公司，TLR4抗体购自Santa Cruz公司，NF-κB抗体购Santa Cruz公司，BCA蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术研究所。 样本采集和处理 标本采集 分别于缺血/再灌注损伤24 h后采集大鼠下腔腹腔静脉血待测，处死各组大鼠获取肾脏组织，一部分迅速置于-80℃中保存，另一部分用固定液固定后，常规石蜡包埋。 血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的检测 将采集的大鼠血液标本常温离心3000 min，离心10 min后，使用Olympus全自动生化分析仪（Au2700）测定血清Cr和BUN水平。 肾组织病理学检查 取大鼠肾组织，用多聚甲醛固定后，脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，脱蜡，HE染色，后在200倍光镜下观察其病理改变。 免疫组化测定Caspase-3的表达情况 肾组织石蜡切片，厚4 μm，按SP法免疫组化试剂盒进行操作，加入Caspase-3（1∶100）抗体及相应二抗，DAB显色5 min后封片。细胞浆或细胞核有棕黄色表达者为阳性细胞。 Real-time PCR检测Bax、Bcl-2和PARP-1 常规Trizol试剂抽提总RNA，核酸蛋白分析仪测定RNA浓度后，取总RNA 1 μg，逆转录生成cDNA。Bax上游引物：5′-TGAACTGGACAACAACATGGAG-3′，下游引物：5′-AGCAAAGTAGAAAAGGGCAACC-3′；Bcl-2上游引物：5′-TTTGATTTCTCCTGGCTGTCT-3′，下游引物：5′-CTGATTTGACCATTTGCCTG-3′；PARP-1上游引物：5′-TCTCCAATCGCTTCTACACCCT-3′，下游引物：5′-TACTGCTGTCATCAGACCCACC-3′；内参β-actin上游引物：5′-TGCTATGTTGCCCTAGA