黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究（医学资料）.docVIP

黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究（医学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：黄花倒水莲提取物抗血脂作用的研究 7 1 材料与方法［3～5］ 8 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究（医学资料） 文1：黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究 阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿的中枢神经系统受损性疾病，是最常见的痴呆类型[1]。随着人口老龄化，AD已成为致老年人死亡的第四大疾病[2]。黑水缬草（Valeriana amureis）为败酱科缬草属植物，具有镇静、抗抑郁及抗心血管疾病等作用[3]，有研究表明黑水缬草具有治疗AD的功效[4]。本研究运用代谢组学技术研究黑水缬草提取物对AD的调控机制，为AD的防治提供新的思路。 1 材料与方法 试剂与仪器 黑水缬草由安国市瑞泰堂药材行提供；Aβ25～35由美国Sigma公司生产；色谱乙腈、色谱甲醇，；TGL-16台式高速冷冻离心机（长沙湘仪离心机有限公司，离心腔直径250 mm）；仪器为液相系统Wate AcquityTM Ultra Performance Liquid Chromatography（UPLC）System，质谱仪Micromass Quattro microTM API三重四级杆质谱仪，美国Wate公司。 实验动物 12周雄性KM小鼠24只，体重18～22 g，由沈阳药科大学实验动物中心提供，动物合格证号[SCXK（辽）2010-0001]。置于室温（25±2）℃，12/12 h昼夜循环光照条件下生活，自由摄食、饮水。 黑水缬草提取物制备 将500 g干燥的黑水缬草根及根茎粉碎成粗粉，以10倍体积的95%乙醇回流提取3次，每次 h，滤过，回收乙醇液，减压浓缩，得150 g乙醇提取物，即黑水缬草95%粗提物。 AD模型制备 实验小鼠适应性喂养1周，运用完全随机方法，分为对照组、AD模型组和治疗组，每组8只。采用小鼠双侧侧脑室注射Aβ25～35蛋白的方法制备AD模型。小鼠麻醉后，双侧侧脑室（以前囟为起点，沿矢状缝后移 mm，然后侧移 mm，垂直进针 mm）各缓慢注射3 μL聚合态Aβ25～35溶液，对照组双侧侧脑室注射等量生理盐水。 给药方法 造模后第3天开始灌胃，治疗组小鼠给予95%黑水缬草粗提物（用2%吐温80溶液做溶剂配成 g/mL溶液）2 g/kg，AD模型组和对照组给予等量的2%吐温80溶液。每日1次，实验进行30 d。 Morris水迷宫 实验进行6 d，期间小鼠正常灌胃给药。前5 d进行定位航行实验，每日2次，观察小鼠的运动轨迹，若60 s内小鼠未寻到平台，则将其引导致平台，并在上面停留10 s。第6天进行空间探索实验，撤去水中平台，观察并记录小鼠60 s内穿越原平台所在位置的次数及在此象限的停留时间。 样品的采集与预处理 小鼠乙醚麻醉，去眼球取血置于 mL离心管（EP内涂肝素），离心10 min（4℃，12 000 min），取上清液，置于-80℃冰箱保存。预处理：取100 μL样品加入200 μL乙腈，涡旋，离心，取上清后，于氮气下吹干，用100 μL初始流动相复溶，再次涡旋，离心，取上清，重复2次，后取5 μL进入液相色谱系统。 色谱和质谱条件 色谱条件：ACQUITY UPLCR BEH C18色谱柱（ μm， mm×50 mm Wate，Made in Ireland），流动相A1为%甲酸水，B1为%甲酸乙腈，流速 mL/min。梯度洗脱：0 min，80% A1；0～1 min，50%～80% A1；～ min，35%～50% A1；～ min，0%～35% A1；12～13 min，0～80% A1；13～14 min，80% A1。进样量 μL，柱温30℃。 质谱条件：采用正离子全扫描方式，扫描范围m/z 100～1000。ESI为离子源，毛细管电压 V，锥孔电压30 V；脱溶剂气为氮气，流速600 L/h，温度350℃。同时进行MS/MS二级扫描获得多级质谱碎片信息。 统计学方法 水迷宫数据经SPSS 分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，三组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用Tukey检验，方差不齐时采用K-W检验，以P 为差异有统计学意义。代谢组学数据：运用MassLynx 对数据分析，经主成分分析（PCA）得到得分图及载荷