10级分子实验汇总5感受态.pptxVIP

大肠杆菌感受态细胞制备及连接产物的转化;背景理论知识;5.1.1 实 验 目 的;5.1.2 感受态及转化实验原理;细菌产生感受态的类型：;大肠杆菌自然条件下很难进行转化，其主要原因是转化因子的吸收较为困难。在转化实验中，通常先采用人工的方法制备感受态细胞，代表性的方法之一是Ca2+诱导法。感受态形成后，细胞生理状态会发生改变(两种假说)，出现各种蛋白质和酶，负责供体DNA的结合和加工等。细胞表面正电荷增加，通透性增加，形成能接受外来的DNA分子的受体位点等。;感受态细胞形成的两种假说：;5.1.3 制备感受态细胞方法;CaCl2诱导大肠杆菌形成感受态细胞; 制备好的感受态细胞每100uL分装一支EP管 轻轻混匀----可以用tip头轻轻搅匀. 4℃保存（不加甘油），可保存一周； 加30%甘油，-20 ℃保存，可保存一月； 加30%甘油， -80 ℃保存，可保存六月；;受体菌: (一般不带特异的筛选标记） E.Coli DH5α, JM109, TG1, BL21, HB101 外源质粒: （一般都带有特异的筛选标记） 根据用途和筛选需要选择: 如进行蓝白斑筛选时可选用DH5α、JM109、TG1； 用T7启动子进行原核表达时可选用BL21(DE3)。;重组子的筛选方法常用的有两种方法： 抗生素筛选法： 菌株为某种抗性缺陷型， 而质粒上带有