磁珠法拭子基因DNA提取试剂盒.docVIP

磁珠法拭子基因组DNA提取试剂盒 MagBeadsSwabDNAExtractionKit 【目录号】SDE-5010、SDE-5030、SDE-5100【运输条件】2~25℃； 【保留条件】磁珠悬浮液2~8℃；蛋白酶K-20℃；其余组分室温； 【试剂盒组成】 KitComponent SDE-5010 SDE-5030 SDE-5100 试剂盒组成 适用于100份样品 适用于300份样品 适用于1000份样品 ①SDE-Buffer1 40mL 120mL 400mL 拭子保留液 ②ProteinaseKsolution 2mL 6mL 20mL 蛋白酶K溶液 ③SDE-Buffer2 20mL 60mL 200mL 拭子缓冲液 ④SDE-MagneticBeads 8mL 24mL 80mL 磁珠悬浮液 ⑤WashBuffer1 60mL 180mL 600mL 冲刷液1 ⑥WashBuffer2 30mL 90mL 150mL*2 冲刷液2（浓缩液） (加入120mL无水乙醇) (加入360mL无水乙醇) (加入600mL无水乙醇) ⑦DealcoholBuffer 40mL 120mL 400mL 除醇液 ⑧SDE-EluteBuffer 10mL 30mL 100mL 拭子洗脱液 【注意事项】 磁珠悬浮液禁止屡次冻融和离心，省得磁珠碰到伤害。使用前务必充分混匀； 初次使用试剂盒，请按冲刷液2标签提示加入无水乙醇，稀释备用； 蛋白酶K请于-20℃长久保留，防备屡次冻融；消融后4℃保留，并赶忙使用； 为了达到最正确收效，建议使用新鲜拭子样本，也许4℃存放少于3天的样本，样本屡次冻融将致使核酸得量严重降低； 如需去除RNA请自备RNaseA溶液（100mg/mL，分别液：10mMTris-HCl、1mMEDTA、pH值8.0）； 请务必仔细阅读本试剂盒操作说明书，并严格依据操作步骤达成操作。 1 【产品简介】 本试剂盒适用于从口腔拭子、宫颈拭子等样本中提取基因组DNA或病毒DNA。试剂盒采纳独到分别作用的磁珠和缓冲液系统，磁珠表面修饰有特别化学基团，在必然条件 下对DNA拥有极强的特异性亲和力，而当条件改变时，磁珠可逆的开释DNA，进而达到快速分别纯化DNA的目的，并可最大限度的去除蛋白质及其余杂质，进而保证提取DNA的纯度。所得基因组DNA产物OD260/280比值在1.7~1.9之间，可直接用于酶切、PCR、荧光定量PCR、测序、文库成立等下游实验。本试剂盒可在EP管中进行手动操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现高通量操作。 【试剂盒说明】 样本种类样本量DNA提取范围 口腔拭子、宫颈拭子等1个0.6~3.5μg 【自备仪器、耗材和试剂】 仪器自动版 英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇。 手动版 水浴锅或金属浴、涡旋振荡仪、真空干燥箱、无水乙醇、异丙醇、2.0mLEP管、EP管配套用磁力架。 【仪器自动版操作步骤】 本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可达成32个样本的提取。 1．96孔板上样准备 参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂： 样品孔位 1、7 2、8 3、9 4、10 5、11 6、12 试剂 磁珠悬浮液75μL 异丙醇 冲刷液2 冲刷液2 除醇液 洗脱液 冲刷液1600μL 300uL 600μL 600μL 400μL 100μL 注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃平均；2）为提升效率建议使用排枪。 2．拭子样本裂解 1）将拭子棉头或刮头剪下，转移至2.0mLEP管中，加入400μL拭子保留液、20μL蛋白酶K和200μL拭子缓冲液，使溶液完整浸润拭子，涡旋震荡。 2 注：1）若拭子样本中已经含有保留液，只需补加拭子保留液至400μL即可；2）若需去除RNA， 请在上述混杂液中加入4μLRNaseA溶液。 2）将EP管于58℃温浴15min，时期每隔5min摇晃混匀一次； 3）12000rpm离心30s，将EP管内所有液体采集终究部，待用。 3．上机提取 将所有裂解上清液转入96孔板第2/8列对应孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，调用“拭子DNA提取实验方法”程序，单击“运转”执行程序。 “拭子DNA提取实验方法”程序各参数设置以下，若是原程序不慎扔掉，可自行设定： 步骤 孔位 运转种类 振荡时 分别时 挥发时 振荡 振荡 一组温 二组温 三组温 四组温 编号 间(秒) 间(秒) 间(秒) 幅度 强度 度(℃) 度(℃) 度(℃) 度(℃) 1 1 磁珠转移 2 5 0 5 强 0 0 0 0 2 2 DNA结合 240 5 0 4