第七章重组子的筛选与鉴定.pptVIP

通过表达蛋白进行筛选 外源DNA引入宿主细胞后表达出蛋白质，以此为抗原与相应的抗体发生免疫反应 不依赖于基因表达产物的生物学活性,只要抗原决定序列能被正确表达 外源DNA可以是一个完整编码区，也可能是一个外显子，这些序列可以插入E.coli表达型载体 5. Western 印迹杂交（Western blotting ） Western杂交也与Southern杂交相似，只不过在Blotting过程中转移的是蛋白质而不是 DNA，这种将蛋白质样品从 SDS凝胶通过电转移方式转移到滤膜的方法，称为Western blotting。 其后的杂交过程不是真实意义的分子杂交，而是通过抗体以免疫反应形式检测滤膜上是否存在被抗体识别的蛋白质，并判断其分子量。所用的探针不是DNA或RNA， 而是针对某一蛋白质制备的特异性抗体。 Western blotting 电泳胶里的蛋白质带可以用电转的方法，转到膜上（硝酸纤维素膜、PVDF膜、中性尼龙膜等）。 ① Western（转膜） 胶里的蛋白质带在电场的作用下横向转移到正极一侧的膜上。 膜 胶 蛋白 Western装置 ② Blotting 原理与ELISA相同。 待测蛋白 硝酸纤 维素膜 一抗 二抗 辣根过氧 化物酶 底物 产物， 并发出光 PAGE胶 待测蛋白 底片曝光 辣根过氧化物酶：HRPO 1）先用一抗（待测蛋白的单克隆抗体）与