基因工程第二章基因工程的工具酶.pptVIP

第三十张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 内切酶在DNA上的所有识别位点都被切开。 完全消化（Complete Digestion） 1 2 3 4 1 2 3 4 第三十一张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 只有有限数量的酶切位点被切开。 通过缩短保温时间、降低反应温度或减少酶的用量可达到局部消化的目的。 局部消化 1 2 3 4 1 4 部分酶切（Part Digestion） 第三十二张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 第二节 DNA连接酶（ DNA Ligase ） 1967年，世界上数个实验室几乎同时发现该酶。 2.1 基本性质： 能将两段DNA拼接起来的酶，催化DNA相邻的5‘磷酸基团和3’羟基末断之间形成磷酸二酯键，封闭DNA单链缺口。 第三十三张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 2.2 T4 DNA连接酶的作用机制： ① ATP+DNA ligase(E)→ E-AMP+PPi。 ② E-AMP上的AMP转移到DNA的5’磷酸根上， 使其活化，释放出酶。 ③ 活化的5’磷酸根与相邻的3’羟基形成3’,5’-磷酸二酯键，并释放出AMP。 第三十四张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 第三十五张，课件共五十三张，编辑于2022年5月 8.1.3 两种DNA 连接酶 比较