基因工程第二章基因工程工具酶.pptVIP

4. 酶解过程： 酶解体系的确定； 成分的混匀； 酶切反应； 终止反应。 第三十一张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 终止反应的方法： 如果酶切下来的DNA片段用于克隆实验，则反应中的酶应该消除掉以保证它不会意外地消化掉那些将在以后步骤中加入的其他DNA分子。 “消灭” 酶： 70℃保存很短的一段时间； 苯酚抽提; 加入EDTA(鳌和Mg2+)或加入SDS使酶变性。 第三十二张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 第三十三张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 5.限制性内切酶的酶切结果鉴定 第三十四张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 6. 内切酶对DNA分子的不完全酶解： 完全酶切消化作用。 不完全酶切消化作用（构建基因组物理图谱、基因组文库及片段连接）。 减少酶量，增加反应体系，缩短反应时间。 第三十五张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 六、影响限制性内切酶的活性的因素 酶的纯度 DNA样本的纯度 DNA甲基化的程度 酶切反应的温度和时间 DNA的分子构型 内切酶的缓冲液 第三十六张，课件共八十二张，编辑于2022年5月 如果内切酶处于非最适的反应条件下其识别序列位点有时会发生改变，这时产生错误切割的能力叫内切酶的星活性。 高甘油含量