姜黄素对人脑胶质瘤SHG44细胞抑制及凋亡的实验研究（医疗卫生论文资料）.docVIP

姜黄素对人脑胶质瘤SHG44细胞抑制及凋亡的实验研究（医疗卫生论文资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：姜黄素对人脑胶质瘤SHG44细胞抑制及凋亡的实验研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：姜黄素抑制子宫内膜异位症微血管密度的实验研究 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 姜黄素对人脑胶质瘤SHG44细胞抑制及凋亡的实验研究（医疗卫生论文资料） 文1：姜黄素对人脑胶质瘤SHG44细胞抑制及凋亡的实验研究 近年来，对姜黄素(curcumin)抗癌作用的实验研究表明，姜黄素能抑制体内外多种肿瘤细胞的生长〔1〕，如姜黄素呈时间及浓度依赖性抑制肿瘤细胞HL-60、K562 的增殖，姜黄素也可诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡，且毒副作用小〔2〕。目前应用姜黄素对人脑胶质瘤的药理研究鲜见报道。 1 材料与方法 材料与试剂 胶质瘤SHG-44瘤株购于中国科学院上海细胞研究所，常规行DMEM培养液培养;姜黄素、溴化噻唑蓝四唑(MTT，用PBS 配成2 g/L)、碘化丙啶( propidiumiodide，PI)和RNase A 购自美国Sigma 公司;DMEM 培养基、胎牛血清、胰酶均购自Gibco 公司;鼠抗人caspase-3单克隆抗体为北京中山生物技术有限公司产品。 仪器 酶联免疫检测仪为Bio-Rad 公司产品;流式细胞仪为Beckton-Dickon公司产品;电镜为日立公司产品;荧光分光光度计为日立公司产品。 细胞系的培养与传代 人脑胶质瘤细胞株(SHG-44)采用含1×105 U/L青霉素、100 mg/L链霉素、10%新生牛血清的DMEM 培养液，在37℃、5%CO2及饱和湿度下培养，隔天换液，待细胞长至80%～90%密度时，用% EDTA 和%胰蛋白酶消化，按1∶2传代。 姜黄素贮存液的配制 以少量二甲亚砜(DMSO)助溶，加入DMEM 配制成10 mmol/L的贮存液， μm 微孔滤器过滤除菌，分装，避光-20℃保存，2 周内有效。使用时用含2%血清的DMEM培养液稀释至所需浓度，DMSO 的含量小于% 姜黄素对SHG-44增殖的影响 采用MTT 法检测。取对数生长期细胞，调整细胞浓度为1×108个/L，细胞接种于96孔培养板中，每孔100 μl，24 h后加无血清DMEM 培养液培养48 h，使细胞同步化于静止期。弃上清，加不同浓度姜黄素(20、40、60、80 μmol/L)，每组设5 个复孔，培养48 h，弃上清，每孔加10 μl MTT 和100 μl 无血清DMEM 培养液，继续培养4 h，去培养液，加100 μl DMSO 振荡溶解，酶标仪以测量波长570 nm 测吸光度值。抑制率(%)=[1-(药物组吸光度值/ 对照组吸光度值)]×100% 流式细胞仪检测细胞凋亡率 不同浓度姜黄素作用(20、40、60、80 μmol/L)后，% 胰酶消化，1 000 min离心收集细胞，PBS 液洗2遍，体积分数为80% 乙醇固定过夜。上机前离心5 min(1 000×g)去除乙醇，PBS漂洗2遍，20 g/L碘化丙啶及10 g/L核糖核酸酶37℃，避光孵育30 min后上机检测。每个样本检测10 000个细胞。 细胞凋亡的形态学观察 U251细胞经80 μmol/L姜黄素处理24 h 后，收集细胞用2% 戊二醛PBS 固定(4℃)，1 000×g 离心10 min，PBS 重悬细胞，吸入有琼脂空槽的离心管中，1 000×g离心10 min，切下尖槽内含细胞团的琼脂块，1% 戊二醛固定(4℃)。PBS 漂洗1 次后，1% 锇酸固定2 h。体积分数为30%、50%、70% 乙醇逐级脱水10 min。4%醋酸双氧铀快染过夜。体积分数为、的乙醇脱水10 min，无水乙醇脱水10 min×2次。环氧丙烷置换10 min×2 次。环氧树脂梯度渗透。618环氧树脂包埋60℃〔3〕。金刚刀超薄切片，片厚70 nm。醋酸铅片染2 min。透射电镜观察、摄片。 caspase-3活性的检测 按试剂盒要求进行，每6 h测定不同浓度的药物(20、40、60、80 μmol/L)作用SHG-44的A值。具体为：取1×106细胞，加入细胞裂解液100 μl，反复用吸头吹打并震荡，室温作用30 min，离心取上清液，而后加caspase-3 的底物AC-DEVD-AMC 10 μl(1 g/L)和Hepes 缓冲液900 μl，37℃水浴1 h。在360 nm 激发波长和440 nm 发散波长下用荧光分光光度计检测荧