研究血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的进展（职称论文资料）.docVIP

研究血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的进展（职称论文资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：研究血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的进展 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的作用 7 1 材料与方法 8 2 结果 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 研究血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的进展（职称论文资料） 文1：研究血管内皮生长因子在先兆子痫大鼠肾损伤中的进展 先兆子痫是引起孕产妇及围生儿死亡的重要原因，肾脏损伤所致的大量蛋白尿为其 主要的临床表现。引起肾小球滤过膜通透性增高的原因目前不详。血管内皮生长因子(vasc ular endothelial growth factor，VEGF)是一种强效的增强血管壁通透性的生物活性物质 。有研究表明血浆及胎盘蜕膜局部VEGF水平的改变可能与妊高征的发病有关。但血浆、尿液 VEGF水平与肾脏局部VEGF表达的关系及肾脏局部VEGF的表达与先兆子痫肾损伤的关系至今国 内外尚未有研究。本试验拟通过一氧化氮合酶抑制亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-nitro- arginine，L-NAME)复制大鼠先兆子痫模型[1-2]，检测血浆、尿液中VEGF浓度， 观察肾 小球中VEGF的表达及其表达的强弱与24h尿蛋白排泄量的关系，从而探讨VEGF在先兆子痫肾 损伤中的作用。 1 材料与方法 主要试剂与仪器 L-NAME(美国Sigma公司)，VEGF Elisa试剂盒( 北京中山生物有限公司)，地高辛标记的VEGFmRNA探针(德国Biognostik公司)，VEGF多克 隆抗体(Santa Cruz公司)，SABC试剂盒(武汉博士德生物制品公司)，大鼠尾动脉袖带式 血压计，透射电镜，计算机病理图像分析仪。 动物模型复制与分组取200～250g普通级Wista r雄性大鼠50只和成年Wistar 雄性大鼠25只，按雌:雄=2:1比例同笼混合饲养一夜后，次日清晨当雌性大鼠阴道涂片检 查可见活动的精子时，确认为大鼠妊娠第1d。将孕鼠随机分为两组，A组:先兆子痫模型组 (n=6)，B组:正常妊娠对照组(n=6)。另取6只无妊娠史雌性大鼠作为C组，即未孕L-NAM E处理组。从妊娠第18d开始对A组和B组大鼠分别皮下注射L-NAME和蒸馏水250mg/(kg/d)， 持续4d后于妊娠第22d时处死。C组大鼠于皮下注射L-NAME 250mg/(kg/d)，持续4d后处死 。 24h尿蛋白排泄量的测定 用标 准代谢笼分别与注射前和注射第2、4d收集各组大鼠24h尿液，采用考马斯亮蓝结合法测定24 h尿蛋白排泄量。 收缩期血压的测定 A组和C组大鼠于L-NAME注射前 及L-NAME注射第2、3、4d 测量尾动脉收缩压。具体方法是将大鼠置于预热箱内预热至38℃～40℃，待其安静后用大鼠 尾动脉血压仪在5min内连续测量3次收缩期血压，取平均值。 血浆及尿液标本的采集与检测在注射第4天时经 眼静脉窦采集各组大鼠静 脉血2ml，置于经肝素抗凝的玻璃管，3000min离心10min后取上清液，置于-70℃冰箱保存 待检。大鼠处死后经膀胱穿刺收集各组大鼠尿液，3000min离心10min取上清3ml存放于-70 ℃冰箱保存待检。采用双抗酶联免疫吸附法(ELISA)，通过绘制标准曲线求出标本VEGF的 浓度，为了纠正尿液浓度不同的影响，尿液VEGF含量以尿VEGF/尿肌酐(ng/mmol Cr)来表 达。 原位杂交法大鼠处死后，取一侧肾组织将其置 于4%多聚甲醛液1～2h、脱 水、透明、浸蜡、包埋、连续切片后，具体操作步骤按VEGFmRNA 原位杂交试剂盒说明书进 行。实验设不加探针的阴性对照。显微镜下胞浆呈黄色颗粒状为阳性。 免疫组织化学法 VEGF蛋白用免疫组织化学法检测 ，具体操作步骤见试 剂盒说明书。实验均设不加一抗的阴性对照。显微镜下胞浆呈棕黄色颗粒状者为阳性，蛋白 表达强弱用吸光度(absorbance，A)表示。每张切片随机选取5个肾小球，用免疫组化分析 软件(HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统)计算VEGF阳性着色细胞吸光度。 统计学方法实验数据以x±s表示， 组间数据差异的显著性分析，方差齐者采用t检验，方差不齐时采用t检验。 2 结果 24h尿蛋白排泄量A组大鼠L-N AME注射第2d时24h尿蛋白排泄量[(35 .16±)mg/24h]较注射前[(±)mg/24h]增高，注射第4d时24h尿蛋白排 泄量[(±)mg/24h]更高，P均)。注射后，同