粪大肠菌群的测定电子教案(精).docxVIP

职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库《环境监测》电子教案 职业教育环境监测与治理技术专业教学资源库 《环境监测》电子教案 单 元 教 学 计 划 教师姓名 日期 班级 课程（学习领域）名称 学时数 6 上课地点环境监测 项目四 单元主要教学内容 城镇污水监测 任务 7 粪大肠菌群的测定 能力（技能）目标 1. 熟练掌握多管发酵法测定粪大肠菌群的试验步骤； 教学目标 2. 掌握实验室微生物无菌操作 的步骤和注意事项。 知识目标 掌握粪大肠菌群的数量在卫生学上的重要性； 掌握多管发酵法测定粪大肠菌群的原理及方法。 素质目标 遵守实验室纪律； 培养与组员配合协作的能力。 能力训练任务 多管发酵法测定粪大肠菌群的试验步骤 重点：1. 地表水质量标准中改用粪大肠菌群指标的重要性； 教学重点教学难点 2. 多管发酵法的测定原理。难点：1. 多管发酵法的测定步骤； 2. 无菌操作的质量保证措施。 教学方法、手段教学组织形式 作 业 多媒体讲授、直观演示实验、任务驱动现场演示实验、分组指导 为什么说提高温度培养出的大肠菌群更能代表水质受粪便污染的情况？ 根据试验情况，报告每升水中含粪大肠菌群的数目。 备 注 项目四 城镇污水监测 任务7 粪大肠菌群的测定（多管发酵法） 测定方法和原理 方法名称与适用范围 方法名称：水质 粪大肠菌群的测定——多管发酵法，HJ/T 347-2007。适用范围：适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定 方法原理 粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便，在 44.5℃温度下能生长并发酵乳酸产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群 生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染 的情况。 多管发酵法是以最可能数（most probable number），简称 MPN 来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。 试剂和仪器 培养基和试剂 单倍乳糖蛋白胨培养基成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳 糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水 1000mL 制法： 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL 蒸馏水中，调节pH 为 7.2～7.4，再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在 115℃灭菌 20min，贮存于暗处备用。 三倍乳糖蛋白胨培养基 按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。 注：本试验测定所使用的乳糖蛋白胨培养基，也可使用成品的大肠菌群发酵培养基，如：乳糖胆盐发酵培养基，等。 EC 培养液成分： 胰胨 20g 乳糖 5g 胆盐三号 1.5g 磷酸氢二钾（K HPO ） 4g 2 4 磷酸二氢钾（KH PO ） 1.5g 2 4 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法： 将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌 20min。灭菌后pH 应为 6.9。 仪器和用具 1、仪器：高压蒸汽灭菌器、生化培养箱（恒温箱）、无菌操作台、电子天平； 2、玻璃器皿及用具：玻璃试管、杜氏小管、与试管配套的棉塞或橡皮塞、移液管（1mL、5mL、 10mL）、三角瓶；药匙、接种环、吸耳球、牛皮纸、酒精灯、火柴、镊子、笔、试管架等。 测定过程 培养基制备及灭菌 水样接种量的确定 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为 10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、 0.1mL、0.01mL 或 0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。 表 1 接种水量参考表 由于本次测定的是污水处理厂的出水水样，所以选取的浓度梯度为10-3、10-4、10-5。 乳糖蛋白胨培养基与EC 培养液分装 如接种体积为 10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为 1mL 或少于 1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL 中。 本试验用移液管各移取 10mL 相应培养液于试管，每个稀释浓度准备 5 管待接种。并将杜氏小管倒置放入试管中，确保杜氏小管中没有气泡，盖上塞子密封，并用牛皮纸包扎以备灭菌。 准备其他要灭菌的物品 三角瓶盛装蒸馏水用塞子密封，并用牛皮纸包扎，用于制备无菌水。移液管用牛皮纸或报纸包扎。 灭菌 将上述需要灭菌的培养基及物品放入高压蒸汽灭菌锅，115℃灭菌 20 分钟。 水样制备及稀释 采样 用采样瓶采集污