备课素材：果蝇培养条件优化和唾液腺染色体标本制备技术改进--高一下学期生物人教版必修2.docx

果蝇培养条件优化和唾液腺染色体标本制备技术改进 果蝇具备染色体基数少、世代周期短(10～15d)、子代个数众多、可遗传突变性状多样的特点，因此是科学研究领域服务时间较长、研究较为深入的模式生物之一。通过众多科学研究者的试验，最终发现存在于果蝇唾液腺的巨大染色体是观察染色体畸变如缺失、重复、倒位的最佳豺料。因此，果蝇唾液腺染色体的观察也是遗传学实验中的一个经典实验。 如何快速获取品质优良的果蝇唾液腺材料并且简便制成清晰度高的染色装片，是顺利开展遗传学实验教学首要解决的问题。下面将在果蝇幼虫的培养、唾液腺的剖离、唾液腺的解离、染色、压片等方面进行改进和优化。 1、果蝇幼虫培养基的选择 目前大多实验室所饲养的果蝇为黑腹果蝇，而适用于三龄幼虫培养的品系是野生型黑腹果蝇，它的适应力强，繁殖能力也强，而且在野外环境也能采集到。教材中常用玉米粉红糖培养基，该培养基营养较为丰富，但是配置步骤较多，而且需要添加适量防腐剂去抑制霉菌的生长。笔者发现酿制米酒的酒糟不仅营养丰富，饲养虫体肥大，还能储存较长时间，无需再添加其他防腐剂，这与酒糟中所含低度酒精有关。因此，直接选用糯米酒的酒糟作为培养果蝇三龄幼虫的培养基。为了方便挑取和观察幼虫的形态大小，选择直径为15～20 cm大培养皿(大小皿盖尽量贴合，防止成虫逃逸)作为培养专用器具，使用前要消毒处理。添加酒糟的高度不超过小皿盖的1／2，这么做可以保证果蝇成虫的活动空间，也能为幼虫提供充裕的养分。 2、果蝇幼虫的培养温度 由表1可知，果蝇的最适培养温度为25℃，但是三龄幼虫适宜温度为17～18℃。为此，在接入果蝇成虫1～3 d的培养温度设为25℃，有利于快速产卵，第四天则改为18℃，有助于幼虫减少活动，加快进食，营养物质体内快速积累。待到15～18 d，可以观察到数量众 多的三龄幼虫出现在皿壁上。 3、果蝇唾液腺的剖离 此时，要选择以附着在皿壁、活动缓慢、个体肥大的三龄幼虫。提取的器具可用大头针的钝端、牙签。由于三龄幼虫表面会有食物残渣或分泌物，可采用生理盐水对其进行冲洗。冲洗完毕的幼虫可转到冰块上快速麻醉处理，方便后续剖离操作。再将虫体转移到干净载玻片上，双手各持一只大头针，用左手的大头针将幼虫尾部轻压固定好，接着用右手的大头针尖端准确点到黑色口器部位，径直向前拉伸。学生暂时不能确切判断唾液腺所在位置，因此需要把带有虫体载玻片放到体视镜下观察。唾液腺的镜检特征为一对上小下大的囊状半透明结构，形似丝瓜，通常附有带状灰白色脂肪体，紧连着黑色口器。建议先把虫体尾部直接去除，再小心挑去口器、肠道等器官。 4、果蝇唾液腺的低渗、解离 添加1或2滴蒸馏水，处理2～3 min，促使唾液腺的细胞破裂、染色体尽量分散。用吸水纸小心吸取多余的水，再滴加1或2滴物质的量浓度为1 mol／L的盐酸，促使细胞解离，有利于染色液更好渗透。同样用吸水纸吸取多余的酸液。 5、唾液腺的染色 将改良苯酚品红染液滴入充分解离的材料，静置染色10～15 min。完成染色后，不要急于压片，而是将染色的材料放到高倍镜下观察唾液腺细胞内核膜未撑破，巨大染色体呈线团般紧密缠绕的形态，让学生对巨大染色体有初步印象，避免与肠道残留细胞核的“张冠李戴”。 6、压片 用镊子夹取洁净无痕的盖玻片，盖玻片接触材料的外围染液并与载玻片的接触点保持450斜角，缓缓地下降，确保两者接触面不出现气泡。把两张稍大于载玻片的吸水纸覆盖在盖玻片上，左手的拇指和食指分别轻轻地固定吸水纸与盖玻片重叠的对角，右手拇指朝着盖玻片的中央位置用力压平。切勿来回搓动，否则染色体的结构会严重变形。 7、镜检结果 判断制作良好装片的标准为：细胞膜及核膜己破，染色体分散良好，横纹分带清晰度高，背景较干净。教师可以选取染色体臂分散良好的玻片，指导学生观察染色中心、蓬突、横纹、间纹，引导学生思考为何果蝇染色体数是2凡=8，唾液腺细胞染色体却呈现放射状5长1短的6条臂。 8、结果与讨论 从实验结果可知，制片的改进之处在于：①培养基原料改为酿制米酒的酒糟。果蝇以酵母菌为食，酒糟能够提供大量酵母菌，而且酒糟中还富含糖类、蛋白类营养物质，非常有助于幼虫生长和储存营养，同时酒糟作为酿酒副产品是不难获得的。②幼虫的轻度麻醉，冷冻法能够避免有机溶剂如乙醚的环境污染问题，且简单易行。③对唾液腺细胞低渗和酸解的处理，是促使细胞膜、核膜破裂的有效方法之一。④压片的手法技巧必须明确的是染色体臂分散开来的力量为快速准确地挤压。