检验前过程的步骤对静脉全血细胞RNA谱的影响、血液贮存温度对血细胞RNA谱的影响.pdfVIP

GB/T XXXXX—XXXX/ISO 20186-1:2019 A A 附 录 A （资料性） 检验前过程的步骤对静脉全血细胞RNA 谱的影响 A.1 附录A 和附录B 中实验操作的一般资料 1 体外诊断通用分析前工具和程序的标准化与改进（SPIDIA ）是欧洲委员会资助的一个为期四年半 [30] 的项目，旨在对体外诊断中的检验前程序进行标准化和改进 。 SPIDIA联盟，为了识别和改进影响静脉全血细胞RNA谱检验的关键检验前步骤，进行了两个连续的 泛欧洲比对实验[13][24]。总共有93个和109个欧洲实验室分别参加了比对试验1和比对试验2。比对试验2的 方案包括由SPIDIA联盟做出的改进。两份来自单个供者的血液能力验证标本，都带有血细胞RNA谱稳定 剂（PAXgene2）血液RNA管）或不带血液细胞RNA谱稳定剂（K2EDTA管），由中心SPIDIA实验室制备，随 后运送到参与的实验室。此标本用专用的箱子运送，以保持2℃到8℃的恒温范围。 参与者被要求在接收后（采血后24小时内）立即从一管中提取细胞RNA，在环境温度或冷藏温度下 贮存24小时（采血后48小时内）后从第二管中提取。参与者被要求使用他们常规的实验室程序来分离细 胞RNA，并在干冰上将纯化的RNA样品送回SPIDIA实验室。在SPIDIA实验室，对RNA样品的纯度、产量、 完整性和干扰物质的存在进行了评估。为了分析检验前变量对血细胞RNA谱的影响，通过确认过的标记 物检测来确定RNA样品中选定的转录本的数量[14]。这些包括用RT-qPCR检测FBJ小鼠骨肉瘤病毒致癌基 因同源物（FOS）、白介素8 （IL8）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、FBJ小鼠骨肉瘤病毒致癌基因同 源物B （FOSB）和肿瘤坏死因子受体超家族，成员10c，无胞内结构域的诱变物（TNFRSF10C）。 下面的结果展示了重要的发现。 A.2 采血管类型（有/无血液细胞RNA 谱稳定剂）对特定的血细胞RNA 谱分析的影响 A.2.1 不稳定的血细胞RNA谱 图A.1显示了检验前过程血液中4种基因的不稳定表达。 标本收集于不含血细胞RNA谱稳定剂（K EDTA管,EDTA,n=78）或含血细胞RNA谱稳定剂（PAXgene血液 2 RNA管,PAX,n=28）的采血管中。标本在2℃～8℃下被运送到参与的实验室，并在采血后24小时内分离细 胞RNA[13]。 10 GB/T XXXXX—XXXX