牛亲子鉴定技术规程.pdfVIP

DB ××/T ××××—×××× 牛亲子鉴定技术规程 1范围 本标准规定了牛亲子鉴定的技术方法。 本标准适用于牛亲子鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 NY/T 1672 绵羊多胎主效基因 FecB 分子检测技术规程 SN/T 1193 基因检验实验室技术要求 SN/T 1917 牛地方流行性白血病聚合酶链式反应操作规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本规程。 3.1 亲子鉴定（parentage identification） 利用分子遗传学、生物学及医学的理论和技术判断亲代与子代是否具有血缘关系。 3.2 亲权指数（paternity index，PI） 假设亲代提供生父（母）基因成为孩子生父（母）的可能性和随机亲代提供生父（母）基因成为孩 子生父（母）的可能性比值。 3.3 LOD 值 亲权指数的对数值 3.4 亲权（父、母）相对机会（Relative chance paternity,RCP） 表示疑似亲代是真实亲代的机会。 RCP 的计算： PI RCP (1) PI 1 式中： PI--亲权指数。 多个标记累计的 RCP 计算： 累计RCP 1 （1RCP）  i （2 ） 2 DB ××/T ××××—×××× 式中： RCPi--第 i 标记的 RCP. 3.5 微卫星（DNA microsatellite） 也称短串联重复序列（STR ）或简单重复序列（SSR）。是一类广泛存在于真核生物基因组中的， 核心序列为 2~6bp ，重复次数通常为 15~30 次的 DNA 串联重复序列。 3.6 多重聚合酶链反应（multiplex PCR） 又称多重引物 PCR 或复合 PCR ，是指在同一PCR 反应体系中加入两对以上引物，同时扩增出多个 核酸片段的 PCR 反应。 4 鉴定原理 利用常染色体微卫星分型技术，选取不同染色体上的微卫星位点，采用多重 PCR 技术扩增微卫星 标记，检测微卫星位点的遗传多态性，分型得出各位点等位基因的大小，通过软件统计分析，确定或排 除亲子关系。 5 主要试剂配制 5 除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 的双蒸水；高压灭菌条件为 1.034*10 Pa 压力，蒸汽灭菌 20min.试剂配制见附录 A 。 6 主要仪器设备 见附录 B 。 7 检测方法 7.1 样本采集 静脉采集血样 3~5mL，ACD 抗凝，4 ℃或-20℃保存。对公牛，亦可采集 2~3 剂细管精液，液氮保 存。 7.2 DNA 提取 7.2.1 血液 DNA 的提取 用酚-氯仿抽提法从抗凝血和血凝块中提取基因组 DNA 。抗凝血和血凝块的处理按照 SN/T 1917 的 规定执行。DNA 的提取按照NY/T 1672 中的规定执行。也可用商业化提取试剂盒提取DNA 。 7.2.1 精液 DNA 提取 从细管中取出