靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究（临床医学论文资料）.doc

靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究（临床医学论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“康复医学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文11575字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究 1 1材料与方法 2 文2：靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分 8 1材料与方法 9 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 17 正文 靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究（临床医学论文资料） 文1：靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究 脑性瘫痪(cerebral palsy， CP)是小儿先天性或围产期所发生的脑功能障碍性综合征，以中枢性运动障碍及姿势异常为主，常伴发智力低下、癫痫、语言障碍、视听异常等多重残障，是继脊髓灰质炎被控制后近代最常见的儿童致残性疾病[1] 。目前国内外多种CP康复手段虽有一定疗效，但仍无明显突破。“靳三针疗法”是着名针灸学家靳瑞教授经多年临床实践，汲取古代针灸配穴理论而创造的具有独特理、法、方、穴、术的针灸疗法，对CP患儿多种症状改善有良好的临床效果[2-3] 神经干细胞(neural stem cells ，Cs)是脑内具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞团，在脑损伤后可以被激活并增殖、迁移及分化，使损伤造成的形态与功能上的缺失得以部分恢复。因此，通过某些干预治疗措施诱导、增强自体神经干细胞的增殖，调节其定向分化，以促进自身修复，这已成为治疗脑瘫新的研究热点。本实验采用“靳三针”针刺后的窒息脑瘫幼鼠模型脑组织提取液进行神经干细胞培养，观察该法对神经干细胞增殖与分化的影响，现报道如下。 1材料与方法 11主要试剂及仪器DHanks液、LDMEM、1 mol/L胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)由GIBCOL 公司提供，链霉亲和素生物素复合物(SABC)、二氨基联苯胺(DAB)染色试剂盒由武汉博士德公司提供，神经丝蛋白(neurofilament， NF)、神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、Nestin and brdu试剂盒由基因公司提供。高速冷冻离心机(美国)，Olympus 显微镜(日本)，BD FACSC alibur全自动流式细胞仪(美国)，超净工作台(苏州净化设备公司)，电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械一厂) 12实验动物及造模清洁级健康SD新生大鼠18只，由广州中医药大学实验动物中心提供(粤检证字2003A010号)。SD大鼠被随机分为假手术组、模型组、靳三针疗法治疗组(简称治疗组)，每组各6只。麻醉状态下结扎大鼠(模型组、治疗组)左侧颈总动脉，2 h后吸入体积分数8%氧和92%氮的混合气体2 h(1 L/min)，继续保温1 h后做行为测定，翻身不能、平衡异常、左旋者视为造模成功，以母鼠哺育。假手术组仅分离颈总动脉而不结扎，亦不作低氧处理。 13各组处理方法模型组手术后不做任何处理。治疗组于手术后24 h开始针刺。穴位：百会、颞Ⅰ针、曲池、内关、足三里、涌泉。定位方法：参照《大鼠穴位图谱研制》，结合人与动物骨度类比，顶骨正中定为百会穴;脑损伤侧外耳道口直上08 cm处模拟颞三针之颞Ⅰ针;桡骨近端关节外侧前方的凹陷中取曲池穴;前肢内侧，离腕关节约3 mm左右，尺桡骨缝间取内关穴;足三里穴(即后三里)在膝关节后外侧，腓骨小头下约5 mm处;后肢掌心前正中取涌泉穴。针刺方法：头部穴位平刺，进针后觉针下沉紧即可，百会、颞Ⅰ针接电针仪，连续波，频率5～10 Hz，以穴周组织轻微抖动为度，约3～5 V，持续5 min。曲池、后三里穴用02寸毫针，针1分深左右，亦施电针，参数同上。内关、涌泉速刺微出血，不留针。手术后前7 d仅针四肢部穴位，第8天开始加针头部穴位。每天针刺1次，共14 d。 14脑组织提取液的制备各组于造模后15 d处死，取脑损伤区大脑皮质，按每150 mg脑组织湿质量加1 mL冷冻Tyrode平衡溶液的比例制备匀浆，匀浆液于4℃冰箱内过夜，次日冷冻离心15 000 min共30 min，取上清液过滤除菌，各相同组别之上清液混合，静置备用。 15神经干细胞分离、扩增与鉴定另取1只健康SD新生大鼠，在无菌条件下取出其大脑，放入DHanks液中分离出海马，将之剪碎置于离心管中，以1 000 min离心5 min，吸去上清液，再加入1 mol/L胰蛋白酶消化10 min，用含体积分数10%胎