固定化酶和细胞.pptxVIP

酶应用过程中的一些不足;Contents of chapter 5-1  酶与细胞的固定化 ;;1.酶是蛋白质，稳定性差（热、酸碱、有机溶剂对其有影响）。 2.不能回收，也使产物中混杂酶蛋白。 3.分离纯化困难。 ; 固定化酶和固定化细胞的定义及特点 固定化酶(immobilized enzyme) 被局限在某一特定区域上的、并且保留了它们的催化活力，可以反复、连续使用的酶。;什么是固定化酶？;优点： (1)可提高稳定性。 (2)能回收，易与产物分离，可反复使用。 缺点： (1)存在扩散限制。适于催化小分子物质。 (2)酶活性下降。; 2. 固定化细胞（immobilized cell） 固定在载体上并在一定空间范围内进行生命活动（生长、繁殖、新陈代谢）的细胞。; 优越性： (1)降低成本，省去酶的分离纯化工作; (2)既可作为单一酶，也可作为复合酶系 完成部分代谢过程。 局限性： (1)细胞内多种酶的存在，会形成不需要的副 产物。 (2)细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制 作用。; 3.固定化原生质体 意义： (1)固定化原生质体去除了细胞壁的扩散障碍，有利于氧的传递，营养成分的吸收和胞内产物的分泌。 (2)原生质体不稳定，容易破裂，固定化后，由于载体的保护作用，稳定性提高。;制备固定化酶的依据 1.固定化酶必须能保持酶原有的专一性、高效催化能力和常温、常压下能起催化反应等特点。 2.固定化酶应能回收、贮藏，利于反复使用。 3.固定化酶应用于机械化和自动化操作，所用载体常有一定的机械强度。 4.固定化酶应能保持甚至超过原有酶液的活性。即要保护活性中心基团。 5.固定化酶应能最大程度与底物接近，从而提高产量。具有最小的空间位阻。 6.固定化酶应有最大的稳定性。 7.固定化酶应易与产物分离。;固定化酶的研究从50年代开始，1953年德国的 Grubhofer和Schleith采用聚氨基苯乙烯树脂为载体与羧肽酶、淀粉酶、胃蛋白酶、核糖核酸酶等结合，制成固定化酶。 60年代后期，固定化技术迅速发展起来。1969年，日本的千烟一郎首次在工业上生产应用固定化氨基酰化酶从DL-氨基酸连续生产L-氨基酸，实现了酶应用史上的一大变革。 在1971年召开的第一次国际酶工程学???会议上，确定固定化酶的统一英文名称为Immobilized enzyme。;随着固定化技术的发展，出现固定化菌体 。1973年，日本首次在工业上应用固定化大肠杆菌菌体中的天门冬氨酸酶，由反丁烯二酸连续生产L-天门冬氨酸。 在固定化酶和固定化菌体的基础上，70年代后期出现了固定化细胞技术。 1976年，法国首次用固定化酵母细胞生产啤酒和酒精，1978年日本用固定化枯草杆菌生产淀粉酶，开始了用固定化细胞生产酶的先例。 1982年，日本首次研究用固定化原生质体生产谷氨酸，取得进展。固定化原生质体由于解除了细胞壁的障碍，更有利于胞内物质的分泌，这为胞内酶生产技术路线的变革提供了新的方向。;5.3 酶固定化技术; 5.3 酶固定化技术; 1、吸附法 利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上，而使酶固定化的方法。 常用的固体吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等。 操作简便，条件温和，不会引起酶变性失活，载体廉价易得，而且可反复使用。 由于靠物理吸附作用，结合力较弱，酶与载体结合不牢固而容易脱落，所以使用受到一定的限制。 ;优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 ; 2、结合法 选择适宜的载体，使之通过共价键或离子键与酶结合在一起的固定化方法。 ;第一个离子结合法固定化酶： DEAE-Cellulose 固定化过氧化氢酶 第一个工业化的固定化酶： DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶; 借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联。;; 使载体活化的方法很多，主要的有：重氮化法、叠氮法、溴化氰法、烷基化法等。; 优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。 缺点：反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。 ;3、交联法 借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法。;酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价偶联 酶分子；（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶; 缺点： (1)反应条件激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失大。 (2)制备的固定化酶颗粒较小，给