项目一 显微镜的使用及霉菌形态观察.docxVIP

指定藁玻片厚度/皿10/0. 25160/0. 1740/0. 65160/0.17100/1. 25-- 指定藁玻片厚度/皿 10/0. 25 160/0. 17 40/0. 65 160/0.17 100/1. 25--数值孔径 F放大倍数 160/0. 17 一、实训目的 学习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油镜的基本原理；把握霉菌形态观看的基 本方法，学习涂片的制作，了解霉菌的基本形态。 二、实训原理（-）油镜镜头的识别 油镜头上常亥U有。I （oil immersion）或 HI （homogeneneous immersion） 字样， 有的还 刻有一圈红线或黑线标记，在低倍物镜、高倍物镜和油镜3物镜中，油镜的放大倍数和数 值孔径（numerical aperture）最大，而工作距离最短（图1T）工作距离/皿一 图-1显微镜物镜参数示意图 （-）显微镜的区分率 显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数，更重要的是看它分辩率的大小。区分率 是指显微镜能区分出物体两点间最小距离（D）的力量。D值愈小说明区分率愈高。D值与 光线的波长（入）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比。 从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高区分率。 数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，a ）的一半正弦与介质折射率 （n）的乘积;NA = 〃xsin 一 2 影响数值孔径大小的因素，一是镜口角，二是介质的折射率。 当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折 射，不仅使进入物镜的光线削减，降低了视野的照明度，而且会削减镜口角（图『2A）。当 以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射（图1-2B）,不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增 加数值孔径到达提高区分率的目的。可见光的波长平均为0. 55 u当使用数值孔径为0. 65 的高倍镜时，它能区分两点之间的距离为0.42u叱 而使用数值孔径为1.25的油镜时，能 区分两点之间的距离那么为0. 22 u mo 图1-2介质为空气（A）与介质为香柏油（B）时间线通过的比拟 三、实训用品与材料 木霉（Trichoderma）、显微镜、接种针、接种环、无菌水、擦镜纸、载玻片、盖玻片。 四、实训操作步骤 （-）制片 .预备载波片 载玻片应洁净、无油污，否那么应先擦洁净。方法是先用左手食指和拇 指捏住载波片两端，滴上2?3滴95%酒精，用洁净的双层纱布反复捻转擦洁净，然后在酒 精灯火焰上烘烤几次，烘烤面对上放于实训台上。 .涂片在超净工作台，把接种针在酒精灯上灼烧，冷却后在平皿中挑取少许木霉菌 丝，涂在载玻片上，用接种环在载玻片上滴一滴无菌水、直径约Icmo后将用接种针把菌丝 平铺，盖好盖玻片。 （二）镜检 ,将显微镜置于平稳的实训台上，镜座距实训台边沿约为4cm,坐正，练习用左眼观看。 .调整光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全翻开，聚光器升至与载物台相距 约Imm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的自然 光源宜用平面镜，光线较弱的自然 光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内匀称光明为止（观看染色装片时，光线宜强； 观看末染色装片时，光线不宜太强）。 .低倍镜观看 首先提升镜简，将做好的涂片置于载物台上，用标本夹夹住，将观看位置移至物镜正 下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观看，转动粗调整器使物 镜渐渐提升（或使镜台下降）至觉察物像时，改用细调整器调整到物像清晰为止。移动装片， 把合适的观看部位移至视野中心。 .高倍镜观看 眼睛离开目镜从侧面观看，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，留意避开镜头与玻片 相撞。再由目镜观看，认真调整光圈，使光线的光明度相宜。用细调整器校正焦距使物镜 清晰为止。重点观看菌丝是否分隔，木霉的分生抱子外形特点，分生胞子梗性状等。 （三）镜检完毕后工作 ?移开物镜镜头。 .取出装片。 .擦净显微镜，将各局部还原。将接物镜呈“八”字形降下，不行使其正对聚光器， 同时降下聚光器，转动反光镜使其镜面垂直于镜座。最终套上镜罩，对号放入镜箱中，置 阴凉干燥处存放。 五、思索与作业 .分别绘出木霉菌的菌丝、分生泡子、分生抱子梗的形态，并注明物镜与目镜的放大 倍数。 ,使用光学显微镜特殊留意哪些问题？ .当物镜从低倍镜转到高倍镜时，比照明度有何要求？应如何调整？