微生物的培养基一.pptxVIP

微生物的培养基一 病毒SARS病毒 禽流感病毒朊病毒(蛋白质病毒)真菌酵母菌和霉菌青霉如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构 一、课题目标: 了解有关培养基的基础知识,进行无菌技术的操作,进行微生物的培养。二、课题重点和难点:无菌技术的操作。三、技能目标: 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术,熟练、规范地进行无菌操作,成功地培养微生物。一 基础知识:(1)按培养基的化学成分分:·天然培养基·合成培养基·半合成培养基阅读课本P8第三段分别说出它们的优点、缺点。(2)按培养基的物理形态分:液体培养基半固体培养基固体培养基(3)按培养基的功能分: P12基础培养基选择培养基鉴别培养基各种培养基的具体配方不同,但一般都包括哪些成分？答:不管哪种培养基,一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质。 注: 另外还需要满足微生物生长对pH、特别营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 二 无菌技术:无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。阅读P8---P9说出消毒和灭菌有何不同？(1)常用消毒的方法:1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法:70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(2)常用灭菌的方法:1、灼烧灭菌:2、干热灭菌:160-170 ℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌:100kPa、121 ℃下维持15-30min、无菌技术:分类定义方法灭菌法杀灭一切微生物物理法:热力、辐射、微波、等离子体化学法:醛类、烷化剂高效消毒法杀灭一切致病微生物紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等中效消毒法杀灭除芽孢外的致病微生物超声波、碘类、醇类、酚类低效消毒法杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子常识1、 无菌技术包括:(1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ;(2)将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ;(3)为幸免周围微生物污染,实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行;(4)幸免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。2、 消毒方法:(1)日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法;(2)对一些不耐高温的液体,则使用 巴氏 消毒法(作简要介绍);(3)对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果,然后使用 紫外线 进行物理消毒。(4)实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒;(5)饮水水源用 氯气 进行消毒。3、灭菌方法:(1)接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法;(2)玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法,所用器械是 干热灭菌箱 ;(3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法,所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。(4)表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法,所用器械是 紫外灯 。三、实验操作 1、制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌)【补充】培养基的配制原则:①目的要明确:依照培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。②营养要协调:培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如:碳氮比4∶1时,谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少;碳氮比为3∶1时,菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜:细菌培养基pH中性或偏碱性,霉菌培养基呈酸性。操作步骤:1、配制:计算、称量、熔化2、调节pH:　用3%的HCI/NaOH调节 pH 7、0--- 7、23、分装:分装过程中注意不要使培养基沾 在 管口或瓶口上,以免沾污棉塞 而引起污染。分装三角烧瓶的量 以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。4、包扎: 5、灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,再放入高压蒸气灭菌锅,在压力为100kPa、温度为121℃,灭菌15～30min。 将培养皿用旧报纸包裹,放入干热灭菌箱内,在160～170 ℃下灭菌2h。 6、倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时,在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板,无杂菌污染才可用来接种、 7、无菌检查: 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否完全。倒平板:菌种的保存 1、临时保藏:接种到固体斜面培养基,菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存:甘油冷冻管藏法注意:问题讨论1、培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。您用什么方法来估计培养基的温度？ 答:能够用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感受锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就能够进行倒平板了。2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。3