血脂及血浆脂蛋白检验.pptVIP

混匀，置于37℃水浴箱，放置5分钟，以空白管调零点，在 500nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管1吸光度 上清血清胆固醇浓度= × 胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 测定管2吸光度 总胆固醇浓度= × 胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 上清LDL-C = TC - 上清液胆固醇浓度 参考范围 40岁以上成人 2.70~3.10 mmol/L 合适水平 3.36 mmol/L 危险水平 4.41 mmol/L Page ? * 【临床意义】 LDL-C水平与冠心病的发病率呈正相关 LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素 由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。 临床上以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。 Page ? * * 简介 ApoAⅠ 是HDL的主要结构蛋白 约占HDL蛋白总量的64% ApoB100 是LDL的主要结构蛋白 约占LDL蛋白总量的95% 因此， ApoAⅠ和 ApoB100 可以直接反映HDL和LDL的含量。 Page ? * 血清载脂蛋白测定 免疫化学法： 单向免疫扩散（RID） 电免疫分析（如火箭电泳法） 放射免疫分析（RIA） 酶联免疫吸附分析（ELISA） 免疫浊度法等 早期 目前： 目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法，包括 免疫散射比浊法（INA）和免疫透射比浊法（ITA）。 Page ? * 免疫透射比浊法 原理 光线通过特异性抗原抗体复合物溶液时被吸收和散射， 使透射光减弱，其减弱程度与免疫复合物含量成正比，即与 抗原含量成正比。 Page ? * 试剂与器材 1、酶应用液 2、参考血清 3、器材 试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、 恒温水浴箱 Page ? * 实验操作 取3支试管，按下表操作 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 待测血清 0.02 — — 参考血清 — 0.02 — 蒸馏水 -- -- 0.02 酶应用液 2.00 2.00 2.00 Page ? * 混匀，置于37℃水浴箱，放置15分钟，以空白管调零点，在 510nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管吸光度 血清胆固醇（mmol/L）= × 参考胆固醇浓度（mmol/L） 标准管吸光度 参考范围 3.10~5.70 mmol/L Page ? * 评价： 主要缺点是： 优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。 本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。 Page ? * 影响TC水平的因素 ①年龄与性别； ②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高； ③遗传因素； ④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。 【临床意义】 病理性高TC血症：见于脂肪肝、肝脏肿瘤、甲状腺功能亢进 严重糖尿病、动脉粥样硬化等。 病理性低TC血症：见于肝脏疾病如急性肝坏死、肝硬化， 甲状腺功能亢进，恶性贫血、溶血性贫血 营养不良等 Page ? * * 简介 三酰酯甘油（TG）是由一分子甘油和三分子脂肪酸组成。 每一分子三酰酯甘油含有2~3种不同的脂肪酸。 Page ? * 血清（浆）甘油三酯的测定方法 气相层析 高效液相层析 红外分光光度法 散射比浊法 化学法 酶法 Page ? * 基本操作： （一）化学法 分溶抽提-乙酰丙酮显色法 1、抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷 脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用KOH作皂化剂 3、氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4、显色：甲醛的定量主要有两种方法： ①甲醛与变色酸(4，5-二羟-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 ②甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 Page ? * 实践步骤 加入物（ml）