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粉红粘帚霉G 019浅盘发酵工艺研究 粉红粘帚霉g-019浅盘发酵工艺研究 　　摘要为提高孢子产量，对粉红粘帚霉g-019浅盘发酵工艺进行了研究，开展了固态发酵基质和营养液成分的筛选以及含量的单因素试验。结果表明，最佳发酵工艺为：固态发酵基质为麸皮75%、玉米粉15%、啤酒糟10%，营养液为糖蜜2%、磷酸氢二钾0.15%、硫酸镁0.05%，料液比1∶1。在此条件下发酵10d，孢子数可达1.07×1010cfu/g。 　　关键词粉红粘帚霉;浅盘发酵;筛选;工艺优化 　　中图分类号tq920.6文献标识码a 　　文章编号1007-5739（2020）09-0092-03开放科学（资源服务）标识码（osid） 　　abstractinordertoimprovethesporeyieldofgliocladiumroseum，thesolidfermentationmediumandnutrientsolutionwerescreenedandthesinglefactorexperimentofthecontentwerecarriedout.theresultsshowedthattheoptimumfermentationconditionswereasfollows：75%bran，15%cornmeal，10%brewer′sgrains，2%molasses，0.15%potassiumhydrogenphosphate，0.5%magnesiumsulfate，materialliquidratio1∶1.undertheseconditions，thenumberofsporescouldreach1.07×1010cfu/gin10days. 　　keywordsgliocladiumroseum;shallowplatefermentation;screen;techniqueoptimization 　　粉红粘帚霉（gliocladiumroseum），属半知菌门丝孢纲丛梗孢目丛梗孢科粘帚霉属[1]，是自然界一类重要的寄生菌，可寄生于植物和線虫活体内，也可作为腐生生物腐生长。粉红粘帚霉近年来在农业中的应用得到了广泛的开发，在植物线虫病[2]、灰霉病[3-6]、玉米基腐病[7]、林果枝干病[8]、水稻纹枯病[9]和黄瓜枯萎病[10]等的生物防治上表现出巨大的开发潜力。 　　本研究为降低成本、提高产量，采用浅盘发酵法，对固态基料、营养液的成分和含量进行了单因素筛选和优化，以期筛选出最优培养基配比，提高产孢量，为后续研究和工业化生产提供理论指导。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料 　　1.1.1供试菌种。粉红粘帚霉g-019，为公司筛选、菌种库保存的菌种。 　　1.1.2试剂。硫酸铵、硝酸钠、尿素、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、氯化钙等，均为分析纯（ar）;蔗糖、葡萄糖、糖蜜、蛋白胨、酵母粉、琼脂，均为生化试剂级（br）;稻壳、麸皮、木薯渣、秸秆粉、麦粒、玉米粉、木薯粉、豆饼粉、花生饼粉、啤酒糟等，均符合试验要求。 　　1.1.3仪器。电子天平、高压蒸汽灭菌锅、电加热干燥箱、恒温振荡培养箱、霉菌培养箱、生物显微镜、粉碎机。 　　1.1.4培养基。平板培养基为pda培养基，液体菌种培养基为pdb培养基。 　　1.2试验方法 　　1.2.1菌种保存与活化。将菌种库甘油管菌种划线接种于pda平板培养基上，在28℃条件下培养7d;使用时用接种环挑取一环孢子接种于液体pdb培养基中，摇床28℃、转速160r/min培养3d。 　　1.2.2浅盘发酵。按照比例配制固态发酵培养基，并装于长20cm、宽10cm、高5cm的浅盘中，用8层纱布和1层牛皮纸封口，121℃灭菌20min。待物料冷却后，在超净工作台上去除纱布和牛皮纸，用灭菌的玻璃棒打散物料，接种液体菌种10%，并混合均匀，用灭菌的3层纱布封口，移至霉菌培养箱，于28℃、湿度70%条件下培养10d。 　　1.2.3固态基质筛选。分别以稻壳、麸皮、木薯渣、秸秆粉为固态基料进行浅盘发酵试验，筛选出最佳基质后，以4∶1的比例分别与麦粒、玉米粉、木薯粉、豆饼粉、花生饼粉、啤酒糟混合发酵，并将筛选出的原料以0（ck）、5%、10%、15%、20%、25%的浓度梯度与基质混合，筛选固态基质最佳比例。每个处理3个平行。 　　1.2.4营养液筛选。在纯化水中分别加入1%的葡萄糖、蔗糖、糖蜜作为速效碳源，加入1%的硫酸铵、尿素、硝酸钠、蛋白胨、酵母粉作为速效氮源，并根据筛选结果分别以0（ck）、1%、2%、3%、4%