临床免疫学检验：第9章 化学发光免疫分析技术.pptVIP

第九章 化学发光免疫分析技术 《临床免疫学检验》 第九章 化学发光免疫分析技术(Chapter 9 Chemiluminescence Immunoassay) 《临床免疫学检验》 第九章 化学发光免疫分析技术 发光免疫分析：是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。 兼具有抗原抗体反应的特异性，又具有发光分析的高敏感性。 第九章 化学发光免疫分析技术 化学发光：是指伴随化学反应过程所产生的光的反射现象。发光剂在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或中间态分子中的电子跃迁到激发态。当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量。 第九章 化学发光免疫分析技术 1．吖啶酯 常用的化学发光剂 在碱性条件下被H2O2氧化时，发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率。 第九章 化学发光免疫分析技术 常用的化学发光剂 2．三联吡啶钌 [RU(bpy)3] 2+ 电化学发光剂。 第九章 化学发光免疫分析技术 常用的化学发光剂 3．鲁米诺及其衍生物 为酶促反应发光剂。HRP可催化鲁米诺氧化发光。 第九章 化学发光免疫分析技术 常用的化学发光剂 4．3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧乙烷（AMPPD） 为酶促反应发光剂。碱性磷酸酶使AMPPD脱磷酸根。 第九章 化学发光免疫分析技术 常用的化学发光剂 5．酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物 酞箐结构在680nm激发光照射下产生瞬间的离子氧，可在200nm范围内瞬间传递给二甲基噻吩衍生物，其产生的紫外光又激发Eu螯合物，释放612nm的光而被检测。 Ⅰ 直接化学发光免疫分析 直接化学发光免疫分析是用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体（抗原），与待测标本中相应的抗原（抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物。加入氧化剂（H2O2）和NaOH，吖啶酯分解、发光。 Ⅰ 直接化学发光免疫分析 Ⅰ 直接化学发光免疫分析 吖啶酯发光的氧化反应简单快速，不需催化剂； 发光迅速，背景噪音低，保证了测定的敏感性； 吖啶酯与抗原/抗体结合稳定，不影响标记物的活性和理化特性； 瞬间发光，持续时间短，对信号检测仪的灵敏度要求高。 Ⅱ 化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析是用HRP或ALP标记抗体（或抗原），与待测标本中相应的抗原（或抗体）发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物。经洗涤后，加入底物（发光剂），酶催化和分解底物发光。 Ⅱ 化学发光酶免疫分析 Ⅱ 化学发光酶免疫分析 Ⅱ 化学发光酶免疫分析 Ⅲ 电化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体（或抗原），以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。 Ⅲ 电化学发光免疫分析 Ⅲ 电化学发光免疫分析 可周而复始地发光，持续时间长，信号强度高，容易测定，容易控制； 三联吡啶钌直接标记抗原/抗体，结合稳定，不影响标记物的理化特性； 试剂灵敏度高，稳定性好。 Ⅳ 鲁米诺氧途径免疫分析 鲁米诺氧途径免疫分析是均相化学发光检测技术。参与免疫反应的一个抗体包被感光珠，内含酞箐；另一抗体包被发光珠，内含二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物。在目标存在的情况下，可形成夹心IC，目标抗原可使两个抗体上标记的感光珠和发光珠紧密的连接在一起，在680nm激发光下，完成鲁米诺氧途径化学发光过程。 Ⅳ 鲁米诺氧途径免疫分析 Ⅳ 鲁米诺氧途径免疫分析 均相反应的模式，反应时间更短； 放大效应，发光迅速，保证了测定的敏感性； 光的产生、传递、放大过程稳定，不受环境因素影响； 可实现对多种生物分子的测定。 化学发光免疫测定的临床应用 灵敏度高，特异性强； 线性范围宽； 标记物稳定，试剂有效期长； 自动化程度高，检测菜单齐全。 思考题 1．化学发光技术中，常用的发光剂有哪些？其原理和特点？ 2．LOCI的原理和特点是什么？ 3．什么是化学发光酶免疫分析？其特点是什么？ 第九章 化学发光免疫分析技术 《临床免疫学检验》