临床免疫学检验：第15章 流式细胞仪分析技术及应用.pptVIP

第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 T细胞（CD3 CD4 CD8） 一、淋巴细胞及其亚群的分析 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 T细胞（CD3 CD4 CD8） 一、淋巴细胞及其亚群的分析 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 B细胞（CD19 CD5） 一、淋巴细胞及其亚群的分析 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 NK细胞（CD3-CD16+CD56+） 一、淋巴细胞及其亚群的分析 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 细胞介导细胞毒试验 细胞内细胞因子测定 二、淋巴细胞功能分析 T细胞内IFN-g的测定 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型 总结 掌握流式细胞仪的分析和分选原理 掌握FS、SS、FL参数及其意义 熟悉单参数直方图和散点图，并能分析简单的流式图 熟悉免疫检测的样品准备和常用的荧光染料 掌握淋巴细胞流式检测的常用标记 了解流式细胞术在免疫学检查中的应用 预习: 第二十一章 超敏反应性疾病及其免疫检测 第二十二章 自身免疫性疾病及其免疫检测 第十五章 流式细胞仪分析技术及应用 《临床免疫学检验》 第十五章 流式细胞仪分析技术及应用(Chapter 17 Detection of complement and its application) 《临床免疫学检验》 第十五章 流式细胞仪分析技术及应用 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 第二节 数据的显示与分析 第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求 第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 流式细胞术（flow cytometry，FCM） 是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。 通过流式细胞仪我们可以干什么？ 相对细胞大小 相对细胞颗粒密度和内部复杂度 细胞表面及内部分子的表达（多参数） 分离纯化细胞 比较形态学观察，免疫组化 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 一、流式细胞仪分析的工作原理 喷嘴 荧光信号或侧向散射光 前向散射光 鞘液 激光 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 基本组成结构 液流系统：样本，鞘液 光学系统：激光光源，分色反光镜，光束成形器，透镜组，光电倍增管 数据处理系统：计算机和软件 一、流式细胞仪分析的工作原理 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 基本组成结构 基本工作原理 一、流式细胞仪分析的工作原理 第一节 流式细胞仪的分析及分选原理 分选的基本原理 二、分选基本原理 第二节 数据的显示与分析 前向散射光（FS） 反映细胞或颗粒的大小 侧向散射光（SS） 反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度 荧光（FL） 反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 一、参数 第二节 数据的显示与分析 前向散射光（SS） 反映细胞或颗粒的大小 二、散射光的测定 第二节 数据的显示与分析 前向散射光（SS） 反映细胞或颗粒的大小 二、散射光的测定 第二节 数据的显示与分析 侧向散射光（FS） 反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度 二、散射光的测定 第二节 数据的显示与分析 侧向散射光（FS） 反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度 二、散射光的测定 第二节 数据的显示与分析 荧光信号检测与放大器 反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 激发光：荧光素吸收激光能量 荧光：荧光素将吸收能量释放，释放较入射光波长更长的光量子 荧光素抗体：荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强 三、荧光测量 第二节 数据的显示与分析 荧光信号检测与放大器 反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 三、荧光测量 第二节 数据的显示与分析 荧光信号检测与放大器 反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 放大器 线性放大器 对数放大器 三、荧光测量 第二节 数据的显示与分析 单参数直方图 四、数据显示方式 第二节 数据的显示与分析 单参数直方图 四、数据显示方式 第二节 数据的显示与分析 单参数直方图 四、数据显示方式 第二节 数据的显示与分析 单参数直方图 四、数据显示方式 第二节 数据的显示与分析 双参数散点图（点图） 四、数据显示方式 人外周血白细胞 第二节 数据的显示与分析 双参数散点图（点图） 四、数据显示方式 人外周血白细胞中的T细胞 第二节 数据的显示与分析 流式细胞仪的多参数分析 四、数据显示方式 人外周血白细胞中的T细胞亚群 “门”的设置 第二节 数据的显示与分析 流式细胞仪的多参数分析 四、数据显示方式 “门”的设置 第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求 制备单细胞悬液 外周血淋巴细胞样品的制备 培养细胞的样品制备 悬浮生长 贴壁生长 新鲜实体组织单细胞悬液