灵芝多糖对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎的保护作用.docxVIP

灵芝多糖对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎的保护作用 　　摘要：灵芝多糖（glp）是灵芝中主要功能性活性成分，具有增强免疫力、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血糖和降血脂等功效。采用大肠杆菌内毒素脂多糖（lps）诱导小鼠乳腺炎，研究灵芝多糖对小鼠乳腺炎的保护作用。试验选取刚分娩的健康雌性小鼠75只，分为空白对照组、lps组、lps+2%glp组、lps+4%glp组和lps+8%glp组，lps+2%glp组、lps+4%glp组、lps+8%glp组分别灌胃2%、4%、8%的灵芝多糖溶液，空白对照组和lps组灌胃等量的生理盐水。注射lps后，测量小鼠体温变化，24h后取乳腺制作石蜡组织切片，并测定乳腺中的il-1β、il-6、tnf-α含量和mpo活性。结果表明，与空白对照组相比，lps组小鼠体温变化显著，乳腺组织切片出现明显的中性细胞浸润现象，il-1β、il-6、tnf-α含量和mpo活性显著上升;lps+2%glp组、lps+4%glp组、lps+8%glp组与lps组相比，小鼠体温变化有显著改善，18h后lps+4%glp组和lps+8%glp组与lps组差异显著（p0.05）;与lps组相比，lps+2%glp组、lps+4%glp组、lps+8%glp组小鼠乳腺中性细胞浸润现象明显减轻，lps+4%glp组和lps+8%glp组的tnf-α、il-1β含量显著低于lps组（p0.05）;lps+4%glp组和lps+8%glp组中il-6含量显著低于lps组（p0.05），lps+2%glp组与lps组差异不显著（p0.05）。上述结果表明，添加4%、8%灵芝多糖可以减轻由lps引起的小鼠乳腺炎反应。 　　关键词：小鼠;灵芝多糖;脂多糖;乳腺炎 　　中图分类号：s853.74文献标志码：a文章编号：1002-1302（2019）23-0197-04 　　梁学武，教授，主要从事反刍动物营养与生产研究，e-mail：faulxw2000@163.com。奶牛乳房炎是奶牛场常见的疾病之一，是奶牛健康养殖中极具挑战性的难题。乳腺炎是由病原微生物感染、理化因素刺激等引起的一种炎症反应。其中病原微生物感染是导致乳房炎的主要因素，研究发现，大肠杆菌是引发乳腺炎的主要环境性致病菌。脂多糖（lps）是大肠杆菌细胞壁外膜主要成分，可通过细胞信号转导系统激活单核巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞等合成和释放多种细胞因子和炎性介质，诱导乳腺炎[1-2]。奶牛乳腺炎是生产中普遍存在的问题，可造成巨大的经济损失。使用奶牛进行试验成本高，且操作复杂，小鼠具有成本低、操作简单、重复性好和易于管理等优点，因此国内外常使用小鼠作为乳腺炎研究的动物模型[3-6]。 　　临床上多采用抗生素方法治疗乳腺炎，但存在细菌产生耐药性、食品及生态安全风险等诸多弊端，且复发率较高[7]。使用抗生素防治乳腺炎风险逐渐显现，寻找新的无毒无抗、绿色安全的替代制剂越来越迫切[8]。灵芝多糖（glp）是灵芝中重要的生物活性成分，具有增强动物机体免疫功能，提高中性粒细胞吞噬和杀菌能力的作用，同时具有降低组织损伤程度的功效[9]。本研究通过灌胃给予小鼠灵芝多糖，对小鼠乳房注射脂多糖建立乳房炎模型，通过分析表观症状和病理学表现及相关免疫因子的表达情况，研究灵芝多糖对小鼠乳腺炎的保护作用，为大肠杆菌性奶牛乳腺炎的预防研究提供理论依据。 　　1材料和方法 　　1.1试验材料 　　试验材料为120只雌性和30只雄性balb/c小鼠，6～8周龄，体质量为18～20g，购自福建中医药研究院。小鼠自由采食和饮水，试验温度为24±1℃，相对湿度为40%～80%。 　　1.2试剂 　　灵芝多糖购自吾灵（福州）生物科技有限公司，含量为30.1%;lps（大肠杆菌055：b5）购自西格玛化学公司。髓过氧化物酶（mpo）活性测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。小鼠tnf-α、il-6和il-1β酶联免疫吸附测定（elisa）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 　　1.3小鼠分组及给药方案 　　试验用小鼠适应性饲养1周后，将雄鼠和雌鼠按1∶4比例合笼饲养，使雌鼠受孕，密切观察小鼠的生长情况，并在受孕第14天摸胎确认怀孕鼠，纳入后期试验。再选取泌乳为1～2d，体表健康，乳区无损伤，质量为40g左右的初产小鼠75只。将75只小鼠均分为5组，分别为空白对照组、lps组、lps+2%glp组、lps+4%glp组、lps+8%glp组。lps+2%glp组、lps+4%glp组和lps+8%glp组分别灌胃0.4ml2%、4%、8%的靈芝多糖溶液，空白对照组和lps组灌胃等量的生理盐水。试验期为17d。每天08：00灌胃1次，最后1次灌胃