第九章兽药残留分析.pptVIP

1.微生物抑制法 微生物法是一种传统的测定四环素类化合物和其他抗生素的分析方法。 测定原理：是根据抗生素对其敏感的特定微生物的生长抑制作用 ,通过抑菌圈的大小来进行样品中抗微生物药物残留的判断(测定抑菌圈直径，样品抑菌圈直径小于阳性对照抑菌圈直径判定为阴性，否则判定为阳性)。 蜡状芽抱杆菌 ATCC 11778 是一种经典的用于分析四环素类的微生物，其对金霉素的灵敏度为 0.005mg / L ，对四环素和土霉素的灵敏度为 0.025mg / L ，对二甲胺四环素的灵敏度为 0.001~0.002mg / L 。 相对于其他分析方法，微生物抑制法操作简便、价格低廉、不需要精密仪器和复杂的样品前处理过程，因而适合大量样品的筛选。 微生物抑制法的最大缺点是不能区分具体的四环素种类，因此也难以进行定量检测。 2.酶联免疫法 间接酶联免疫法可用来检测牛奶中的四环素类抗生素。 四环素-牛血清白蛋白共轭物用于抗体制备，同源的四环素- β -酪蛋白共轭物作为包埋试剂，而羊抗兔 IgG-辣根过氧化物酶作为第二抗体。 牛奶样品经离心脱脂，采用磷酸盐缓冲液至少以 1 :30 的比例进行稀释后，直接采用酶联免疫法进行测定，检测限可达 5 ug / kg 。 当采用商业化试剂盒检测蜂蜜中的四环素、金霉素和土霉素残留时发现其对金霉素具有强烈的交叉反应活性。试剂盒对四环素和金霉素的检测限均为 15 ug / kg ，但由于所用抗体与土霉素的交叉反应活性较低，对土霉素的检测限为 250 u g / kg ． 实验表明，空白蜂蜜样品经缓冲液稀释 50 倍已足以消除基质干扰。 3.薄层色谱法 薄层色谱法（ TLC ）又分为正相薄层色谱（ NP-TLC ）和反相薄层色谱（ RP -TLC ）。 正相薄层色谱一般使用纤维素、硅胶、硅藻土等作为吸附层。总体而言，正相薄层色谱是一种简单的、不需特殊设备的分离方法，但在制板时却要花费大量时间消除 TCs 与金属离子的鳌合作用，故通常在吸附剂和溶剂系统中加入 EDTA 以消除金属离子的影响。 反相薄层色谱分析 TCs 时，溶剂系统中通常加入草酸以消除金属离子的影响．在 RP -TLC 溶剂体系中通常含有磷酸、柠檬酸、酒石酸、 EDTA 等以获得对TCs好的分离效果，但脱尾现象比较严重；在 RP-TLC 溶剂体系中加人草酸后，可以消除 TCs 与金属离子的鳌合作用，减少脱尾现象。 4.高效液相色谱法 反向 LC 操作简单、方法灵活，已成为包括四环素类抗生素在内的许多药物残留检测的主要分析手段。普遍使用的硅胶基反向键合固定相表面存在残存的硅醇基或金属离子（如 Fe 3 ＋，A1 3 + ) ，而四环素类抗生素易与金属离子鳌合，反向柱残存的硅醇基与四环素类抗生素可以通过氢键或离子交换作用，因此导致色谱峰拖尾，保留值不稳定或过长，出现峰形异常和分离度下降。 为避免形成金属鳌合物和在反向 LC 色谱柱上的吸附，在反向 LC 中，优化流动相的组成是四环素类抗生素残留检测的重要方法之一。 通常在流动相中加入酸（如磷酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、 EDTA 等）、有机改性剂（甲醇、乙睛等）、离子对试剂掩蔽剂等，并以加草酸为多数。 第二节 大环内酯类抗生素 大环内酯类抗生素（ MALs ）作为抗生素的一个重要类别被广泛应用于医学与兽医学上对细菌感染的治疗或预防。 这些化合物在结构上均具有一个高度取代的大内酯环结构，大多数的种类母体分属十四元和十六元大环两组 。 在 20 世纪 50 年代末，作为青霉素类化合物的替代品，红霉素就已经开始被使用于兽医临床。到现在已经有相当多品种的大环内酯类抗生素能够同时作为人用和兽医用药，还有一些品种的大环内酯类抗生素已作为禽畜专用的抗生素品种生产． 利用其抗革兰阳性菌以及抗支原体活性对感染性疾病进行预防治疗和对亚临床疾病进行控制。 还有一些类的大环内酯类抗生素具有其他独特的作用： 比如泰乐菌素、螺旋霉素等除抗感染能力之外在低浓度下具有显著的促生长作用，是饲料中常见的促生长剂； 美贝霉素类化合物以及其半合成的衍生物的抗寄生虫和节肢动物的特性成为重要的驱虫剂； 那他霉素则具有明显的抗真菌效力，广泛应用于多种食品，特别是乳制品的防腐中。 在畜牧和食品行业中大环内酯类化合物如此广泛的使用，也衍生出一些消极的后果，其中最为受人关注的是动物源病原菌抗药性的获得给动物、人类健康和环境带来了危害。 在对大环内酯类抗生素作为饲料添加剂的风险防范上，欧盟走在了最前列。 阳江职业技术学院 生命科学与技术系 农兽药残留检测 第九章 兽药残留分析—抗生素类兽药 一、兽