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现代分离技术实验报告 课程：现代分离技术实验报告 班级：应化134班 学号：2021015054 实验名称：金银花中绿原酸的提取与分离 关键字：金银花绿原酸薄层色谱索氏抽取器柱层析 摘要：通过索氏提取器从金银花中提取绿原酸，利用减压 铀、柱层析、紫外检测技术，薄层色谱对绿原酸展开分析，检测。 金银花是人医临床常用的有代表性的清热解毒药,具有 抗菌、消炎、清热解毒、保肝、止痛、免疫调节、降血脂、激动 中枢等多方面的药理学作用，能改善放、化疗所致的白细胞 减少，存有“中药中的青霉素”的美誉。另外，金银花还被广 泛地应用于保健品、化妆品、卷烟、食品等行业。金银花抗 菌的有效成分主要就是绿原酸和异绿原酸，并且常以绿原酸不含 量的高低来评价金银花质量的优劣。采用超声波法和索氏法 均能够较好地从金银花中抽取绿原酸。本实验中使用索氏抽取 (1)掌握渗滤、回流提取、索氏提取等天然生物活性成分的 通常抽取方法； （2)掌握制作薄板及薄板层析、色谱分离、重结晶等天然生 物活性成分的通常拆分与提纯方法； （3）熟悉天然生物活性成分的一般定性检测方法。 （4）培育动手能力和分析及化解实际问题等综合能力。 绿原酸是一种含羟基和邻二酚基的有机酸，极性与乙醇相 将近。因此根据“相近相溶”原理，所含乙醇的溶剂更容易存有 效的提取绿原酸。由于乙醇溶剂的扩散‘渗透作用逐渐通过 金银花细胞壁渗透到至细胞内，熔化了绿原酸，而导致细胞内 外绿原酸的浓度差，于是细胞内的绿原酸溶液不断向外扩 贫，乙醇溶剂不断步入金银花中，如此不断来往，就可以把 绿原酸近于完全溶出或大部分溶出。 四、实验主要用品 (1)材料:金银花（为金银花花蕾和开放花的混合样品，经 烘房研磨后，水泵。） (2)试剂:本实验所用有机、无机试剂均为分析纯。 薄层层析硅胶：gf254和硅胶g，化学纯 柱层析硅胶：硅胶g（粒度100-200目） (3)主要仪器：转动冷却仪、电热恒温鼓风干燥箱、三用紫 外仪、电子分析天平、高效液相色谱仪。 五、绿原酸物理性质 六、实验装置图 图一索氏抽取器图二转动冷却仪 七、实验步骤与现象 1.索氏抽取器对绿原酸的抽取： (1)金银花粗粉称取50g，用滤纸做成筒状嵌入提取器中，用75%乙醇采用索氏提取器回流处理4h（9点-13点10分），发生虹吸36次。提取器内液体颜色逐渐由深墨绿色变为浅黄绿色，烧瓶内液体颜色越来越深，逐渐变为墨绿色。 （2)挑其提取液在转动冷却仪中展开预热铀，温度设置为45℃，铀得浸膏，呈圆形褐绿色。 2.tlc板的制备与活化： （1）在整洁的研钵内重新加入约6g硅胶gf254，在轻轻研磨的同时缓慢重新加入15ml0.5%羧甲基纤维素钠水溶液。稳步研磨约10min，当体系粘稠度适合时，即可展开铺板。 （2)用药匙将适量糊状物均匀摊在干净干燥的载玻片上，然后用手拿住薄板的一端在台面上轻轻振动，直至薄层均匀为止。将铺好的薄板平放在水平的台面上，凉干。 (3)将肥干活后的薄板放进预先恒温至105～110℃的烘箱中活化30min。 3.绿原酸的分离 （1）细拆分：挑一定量浸膏，按1∶1重新加入200-300目硅胶煮样，晒干。 （2）用乙酸乙酯湿法装柱（硅胶200-300目），干法上样，柱体用乙酸乙酯约300ml先进行洗脱，直到柱体褐色基本褪去；然后用乙酸乙酯-甲酸-水（20∶1∶0.1）、乙酸乙酯-甲酸-水（10∶1∶0.1）、甲醇洗脱。流速控制在每1/10柱体积即可。分部收集，每管40ml，均装在小烧杯里，时时点板采样，看在紫外灯下是否有明显荧光斑点显现。 (3)对存有斑点的烧杯中液体展开tlc分析：用事先活化不好的薄层板对每管及搜集液展开tlc分析，点样数视板的大小而的定，每两斑点之间最轻间距不少于8mm，自己实验过程中将右侧第一个点为绿原酸对照点。等展开剂（共同组成较易挥发，特别注意小心留存）跳跃至板层4/5～5/6高度时，抽出薄层板，平放到桌面上，使溶剂溶解干活。然后将薄板放在波长365nm紫外灯下下，观测和记录薄板上斑点的原产情况及其对应的rf值。 （4）结论：根据rf值或斑点高度判断不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑点，表明两管含有相同的成分。发现在第二次洗脱中得到的液体中含有绿原酸，连着2个烧杯中均含有绿原酸，随即将这2杯液体进行