生化工程精品课件-灭菌动力学.pptVIP

§4.4 灭菌动力学 国内一制药厂发酵染菌原因的分析 染菌原因 百分率,% 染菌原因 百分率, % 外界带入杂菌(取样、补料带入) 8.20 蒸汽压力不够或蒸汽量不足 0.60 设备穿孔(夹套渗漏) 7.60 管理问题 7.09 空气系统带菌 26.00 操作违反规程 1.60 停电罐压跌零 1.60 种子带菌 0.60 接种 11.00 原因不明 35.00 现代微生物培养技术建立在纯种培养的基础上，微生物发酵前必须对培养基进行灭菌，以杜绝杂菌进入反应系统。 * 大批发酵罐染菌 ：空气系统; 部分发酵罐(或罐组)染菌：前期可能是种子带杂菌，或灭菌不彻底，中后期则可能是补料系统或管路系统发生问题所造成的; 个别发酵罐连续染菌和偶然染菌 ：设备问题. 染菌原因分析------从染菌的规模来分析 * 1）发酵早期染菌 可能是从种子中带入，或由于培养基灭菌不彻底，或设备有“死角”，清洗不干净而染菌。 2）发酵中后期染菌 可能是无菌空气或中间补料带入杂菌，或发酵设备渗漏，以及操作不合理逐渐侵入杂菌而造成的。 染菌原因分析------从染菌的时间分析 * 耐热性芽孢杆菌：可能是由于原料中原有的芽孢未能杀灭，或者死角或灭菌不彻底。 球菌、酵母：可能是从蒸汽的冷凝水或空气中带来的，或者设备渗漏。 浅绿色菌落(革兰氏阴性杆菌) ：发酵罐的冷却管或夹套渗漏 霉菌：灭菌不彻底或无菌操作不严格 噬菌体：很可能是空气系统，特别是在大风天气后。 染菌原因分析------从染菌的类型来分析 * 不同微生物的热耐受时间差异很大: 营养细胞 霉菌孢子 芽孢杆菌 大肠杆菌在不同温度下的 死亡曲线 1 0 t (min) N/N0 10-1 10-2 10-3 10-4 2 4 6 8 10 60 58 56 54 嗜热脂肪芽孢杆菌在不同温度下的死亡曲线 1 0 t (min) N/N0 10-1 10-2 10-3 10-4 5 10 15 20 25 121 116 110 108 105 * 微生物的死亡速率可用一级动力学表示，即 积分得到, N 表示活细胞浓度; kd也称反应速度常数或比死亡速度常数. 灭菌时间 如果要达到彻底灭菌，即灭菌结束时残留的活微生物数等于0，则灭菌所需的时间应为无限长，这在实际中是不可能的。 * 问题：在121oC，枯草杆菌FS5230的kd为0.047s-1，梭状芽孢杆菌PA3679的kd值为0.03 s-1 ，请问哪一种微生物更耐热？ kd也称反应速度常数或比死亡速度常数. kd的大小与微生物种类与加热温度有关 kd越大，说明微生物在相同条件下越易死亡，因此不耐热. * 微生物的死亡速率常数kd与温度的关系 可用阿伦尼乌斯公式表示: A---频率常数，也称阿累尼乌斯常数，s-1； R---气体常数，8.314J/mol·K； T---绝对温度，K； ΔE---微生物死亡活化能，J/mol。 或培养基成分分解所需活化能. kd值的大小与微生物或营养成分的种类与加热温度有关. 部分物质的失活(分解)活化能ΔE 营养组分 微生物 ΔE (kcal/mol) 1/T lnkd 芽孢杆菌 VB1 ΔE (芽孢杆菌) ΔE (芽孢杆菌) 随着温度的上升，微生物的死亡速率常数kd增加倍数要大于培养基成分的破坏速率的增加倍数。 在热灭菌过程中， 同时会发生微生物死亡和培养基营养破坏这两种过程， 两种过程的进行速度都随温度的升高而加速， 因此可选择合适的灭菌温度和时间来调和二者的矛盾。 通过比较，微生物的死亡速率随温度的升高更为显著， 因此温度对营养成分破坏芽孢的热死亡。 这就是采用高温、瞬时灭菌法的理论基础。 灭菌要达到杀死99.99%的细菌芽孢，有两种方法可以采用， 一种是118oC灭菌15min，另一种是128oC灭菌5min。 哪一种方法好，为什么？ 答：从理论和实践都说明，灭菌过程中同时会发生微生物死亡和培养基破坏，两者进行的速度都随温度升高而加速，但微生物死亡速率随温度升高更显著。因此，对于同一灭菌效果，选择高温瞬时灭菌工艺，这样既可达到需要的灭菌程度，又可减少营养损失。 * * * * * * 梭状芽孢杆菌更耐热。 * * * 叶酸 泛酸 Vb12 b1 嗜热芽孢菌 枯草杆菌 肉毒梭菌 腐败厌气菌 Folic acid 叶酸， pantothenic acid 泛酸， Putrefactive anaerobe 腐败厌氧菌，Clostridium butulinum 肉毒梭菌 * * * * * * * * * 梭状芽孢杆菌更耐热。 * * * 叶酸 泛酸 Vb12 b1 嗜热芽孢菌 枯草杆菌 肉毒梭菌 腐败厌气