N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量的测定方法.pdfVIP

QB/TXXXXX—XXXX 附录A （规范性） N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量的测定方法 A.1 紫外检测器法（仲裁法） A.1.1 试剂和溶液 a）乙腈：色谱纯。 b）N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品（纯度≥98%）。 c）超纯水。 d）磷酸缓冲液：称取3.5g磷酸氢二钾溶于900mL水中，加0.25mL氨水，用磷酸调pH至7.5，并定 容至1000mL。 e）稀释液：乙腈:水=50:50。 A.1.2 仪器与设备 a）高效液相色谱仪，紫外检测器。 b）分析天平。 c）超声波发生器。 d）过滤器。 A.1.3 分析步骤 A.1.3.1 溶液制备 标准储备液：精确称取N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品0.1g(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中， 用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀，经0.22µm 滤膜过滤，25℃静置4h，待用。 供试品液Ⅰ：精确称取烘干的N-乙酰-D-氨基葡萄糖试样0.1g（精确至0.0001g)于100mL容量瓶中， 用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀，经0.22µm 滤膜过滤，25℃静置4h，待用。 A.1.3.2 参考色谱条件如下： a）色谱柱：氨基柱（4.6mm×150mm，3μm），或等效色谱柱； b）流动相：乙腈：磷酸缓冲液（75:25，V/V），混合后超声10min； c）流速：1.5mL/min； d）检测波长：195nm e）进样量：10μL； f）测定温度：35℃。 A.1.3.3 测定 分别吸取标准储备液和供试品液，在上述参考色谱条件下测定。 A.1.3.4 计算 试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖的含量按式（A.1）计算： × ×100% …………………… （A.1） × 式中： w——试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖的含量，单位为（%）； A——试样溶液的峰面积；i 9 QB/TXXXXX—XXXX A ——标准溶液的峰面积； s C——标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； s C——样品溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。i A.1.3.5 精密度 计算结果保留两位小数。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，两次平行测定结果的绝对差 值不应大于算术平均值的 10%。 A.2 蒸发光散射检测器法 A.2.1 试剂和溶液 a）乙腈：色谱纯。 b）N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品（纯度≥98%）。 c）超纯水。 A.2.2 仪器和设备 a）高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器。 b）分析天平。 c）超声波发生器。 A.2.3 分析步骤 A.2.3.1 溶液制备 标准储备液：精确称取N-乙酰-D-氨基葡萄糖对照品0.1g(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶 中，加超纯水适量，超声溶解并定容至刻度，摇匀，待用。 供试品液：精确称取烘干的供试品0.1g(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中，加超纯水适量， 超声溶解并定容至刻度，摇匀，待用。 A.2.3.2 参考色谱条件如下： a）色谱柱：氨基柱（4.6mm×250mm，5μm），或等效色谱柱； b）流动相：乙腈：水（80：20，V/V）； c）气体流速：1.2L/min； d）流速：0.8m